广东医学
廣東醫學
엄동의학
GUNAGDONG MEDICAL JOURNAL
2014年
13期
1980-1983
,共4页
潘星辰%周韶璋%戴辉%韦江%彭海燕%宋向群
潘星辰%週韶璋%戴輝%韋江%彭海燕%宋嚮群
반성신%주소장%대휘%위강%팽해연%송향군
低氧诱导因子-1α%EML4-ALK阳性肺腺癌细胞株H2228细胞%凋亡%克唑替尼
低氧誘導因子-1α%EML4-ALK暘性肺腺癌細胞株H2228細胞%凋亡%剋唑替尼
저양유도인자-1α%EML4-ALK양성폐선암세포주H2228세포%조망%극서체니
HIF-1 α%EML4-ALK positive lung adenocarcinoma cell line H2228%apoptosis%crizotinib
目的 探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在克唑替尼诱导EML4-ALK阳性肺腺癌细胞株H2228凋亡中的作用.方法 (1)用10、30、90、270、810 nmol/L浓度梯度的克唑替尼处理H2228细胞48 h,MTF比色法测定细胞增殖能力.(2)用100、200、300 nmol/L克唑替尼处理H2228细胞48 h,Annexin V流式细胞仪检测凋亡细胞.(3)RT-PCR实验:①采用50、100、200、400、800μmol/L浓度的低氧模拟剂氯化钴(CoCl2)作用H2228细胞24 h,观察HIF-1α的mRNA表达水平变化.②常氧对照组(0.5% DMSO培养基48 h)、常氧+克唑替尼组(0.5% DMSO培养基24 h+500 nmol/L克唑替尼24 h)、低氧对照组(200 μm/L CoCl224 h+0.5% DMSO培养基24 h)、低氧+克唑替尼组(200 μm/L CoCl2 24 h+500 nmol/L克唑替尼24 h),采用RT-PCR方法检测各组细胞HIF-1α、Akt、VEGF mRNA的表达水平.结果 (1) MTT实验结果示:随着克唑替尼药物浓度升高,H2228细胞增殖抑制率逐渐升高,呈剂量依赖性,半增殖抑制浓度(IC50)为335 nmol/L.(2)凋亡实验结果示:H2228细胞凋亡率随克唑替尼浓度增加而升高,呈剂量依赖性.(3)RT-PCR实验结果示:①随着CoGl2浓度的增加,HIF-1α的mRNA表达水平逐渐下降,呈剂量及时间依赖性,于200 μm/L浓度时下降最明显.②与对照组相比,无论是在常氧还是低氧,克唑替尼组H2228细胞HIF-1α、Akt的mRNA表达均上调,VEGF的表达下调.与常氧+克唑替尼组比较,低氧+克唑替尼组HIF-1αmRNA上调更明显(P<0.05).结论 克唑替尼对肺腺癌细胞株H2228的增殖抑制和诱导凋亡作用呈剂量依赖性,HIF-1α mRNA的上调在克唑替尼诱导肺癌细胞凋亡过程中发挥重要作用.
目的 探討低氧誘導因子-1α(HIF-1α)在剋唑替尼誘導EML4-ALK暘性肺腺癌細胞株H2228凋亡中的作用.方法 (1)用10、30、90、270、810 nmol/L濃度梯度的剋唑替尼處理H2228細胞48 h,MTF比色法測定細胞增殖能力.(2)用100、200、300 nmol/L剋唑替尼處理H2228細胞48 h,Annexin V流式細胞儀檢測凋亡細胞.(3)RT-PCR實驗:①採用50、100、200、400、800μmol/L濃度的低氧模擬劑氯化鈷(CoCl2)作用H2228細胞24 h,觀察HIF-1α的mRNA錶達水平變化.②常氧對照組(0.5% DMSO培養基48 h)、常氧+剋唑替尼組(0.5% DMSO培養基24 h+500 nmol/L剋唑替尼24 h)、低氧對照組(200 μm/L CoCl224 h+0.5% DMSO培養基24 h)、低氧+剋唑替尼組(200 μm/L CoCl2 24 h+500 nmol/L剋唑替尼24 h),採用RT-PCR方法檢測各組細胞HIF-1α、Akt、VEGF mRNA的錶達水平.結果 (1) MTT實驗結果示:隨著剋唑替尼藥物濃度升高,H2228細胞增殖抑製率逐漸升高,呈劑量依賴性,半增殖抑製濃度(IC50)為335 nmol/L.(2)凋亡實驗結果示:H2228細胞凋亡率隨剋唑替尼濃度增加而升高,呈劑量依賴性.(3)RT-PCR實驗結果示:①隨著CoGl2濃度的增加,HIF-1α的mRNA錶達水平逐漸下降,呈劑量及時間依賴性,于200 μm/L濃度時下降最明顯.②與對照組相比,無論是在常氧還是低氧,剋唑替尼組H2228細胞HIF-1α、Akt的mRNA錶達均上調,VEGF的錶達下調.與常氧+剋唑替尼組比較,低氧+剋唑替尼組HIF-1αmRNA上調更明顯(P<0.05).結論 剋唑替尼對肺腺癌細胞株H2228的增殖抑製和誘導凋亡作用呈劑量依賴性,HIF-1α mRNA的上調在剋唑替尼誘導肺癌細胞凋亡過程中髮揮重要作用.
목적 탐토저양유도인자-1α(HIF-1α)재극서체니유도EML4-ALK양성폐선암세포주H2228조망중적작용.방법 (1)용10、30、90、270、810 nmol/L농도제도적극서체니처리H2228세포48 h,MTF비색법측정세포증식능력.(2)용100、200、300 nmol/L극서체니처리H2228세포48 h,Annexin V류식세포의검측조망세포.(3)RT-PCR실험:①채용50、100、200、400、800μmol/L농도적저양모의제록화고(CoCl2)작용H2228세포24 h,관찰HIF-1α적mRNA표체수평변화.②상양대조조(0.5% DMSO배양기48 h)、상양+극서체니조(0.5% DMSO배양기24 h+500 nmol/L극서체니24 h)、저양대조조(200 μm/L CoCl224 h+0.5% DMSO배양기24 h)、저양+극서체니조(200 μm/L CoCl2 24 h+500 nmol/L극서체니24 h),채용RT-PCR방법검측각조세포HIF-1α、Akt、VEGF mRNA적표체수평.결과 (1) MTT실험결과시:수착극서체니약물농도승고,H2228세포증식억제솔축점승고,정제량의뢰성,반증식억제농도(IC50)위335 nmol/L.(2)조망실험결과시:H2228세포조망솔수극서체니농도증가이승고,정제량의뢰성.(3)RT-PCR실험결과시:①수착CoGl2농도적증가,HIF-1α적mRNA표체수평축점하강,정제량급시간의뢰성,우200 μm/L농도시하강최명현.②여대조조상비,무론시재상양환시저양,극서체니조H2228세포HIF-1α、Akt적mRNA표체균상조,VEGF적표체하조.여상양+극서체니조비교,저양+극서체니조HIF-1αmRNA상조경명현(P<0.05).결론 극서체니대폐선암세포주H2228적증식억제화유도조망작용정제량의뢰성,HIF-1α mRNA적상조재극서체니유도폐암세포조망과정중발휘중요작용.