中国医学科学院学报
中國醫學科學院學報
중국의학과학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE SINICAE
2014年
4期
420-425
,共6页
杨根欢%吴为%李砚川%倪冷%王占启%宋希涛%刘昌伟
楊根歡%吳為%李硯川%倪冷%王佔啟%宋希濤%劉昌偉
양근환%오위%리연천%예랭%왕점계%송희도%류창위
血红素加氧酶-1%慢病毒%稳定细胞株%氧化损伤
血紅素加氧酶-1%慢病毒%穩定細胞株%氧化損傷
혈홍소가양매-1%만병독%은정세포주%양화손상
heme oxygenase-1%lentivirus%stable cell lines%oxidative damage
目的 构建稳定表达人血红素加氧酶-1 (HO-1)的细胞系,探讨内源性过表达HO-1对抗细胞氧化损伤的作用.方法 PCR扩增HO-1基因并将其克隆至改造的慢病毒载体pLentiLox3.7中,构建携带目的基因的重组质粒.用重组质粒转染HEK293T细胞,并用Western blot检测H0-1的表达.将重组质粒与慢病毒辅助质粒(plp1、plp2、VSVG)共同转染HEK293T细胞,包装有活力的慢病毒.用携带H0-1的慢病毒感染HEK293T细胞,筛选出能稳定表达目的基因的单克隆,并行Western blot检测H0-1的表达.将过氧化氢加入正常的及过表达H0-1的HEK293T细胞和人脐静脉内皮细胞,检测细胞内活性氧的含量.结果 成功筛选出能稳定表达H0-1的单克隆细胞系并扩大培养,Western blot检测其H0-1的表达明显升高.加入过氧化氢后,过表达H0-1的HEK293T细胞和人脐静脉内皮细胞内的活性氧明显减少.结论 成功构建了能稳定表达人H0-1的细胞系,内源性过表达H0-1能够对抗细胞的氧化损伤.
目的 構建穩定錶達人血紅素加氧酶-1 (HO-1)的細胞繫,探討內源性過錶達HO-1對抗細胞氧化損傷的作用.方法 PCR擴增HO-1基因併將其剋隆至改造的慢病毒載體pLentiLox3.7中,構建攜帶目的基因的重組質粒.用重組質粒轉染HEK293T細胞,併用Western blot檢測H0-1的錶達.將重組質粒與慢病毒輔助質粒(plp1、plp2、VSVG)共同轉染HEK293T細胞,包裝有活力的慢病毒.用攜帶H0-1的慢病毒感染HEK293T細胞,篩選齣能穩定錶達目的基因的單剋隆,併行Western blot檢測H0-1的錶達.將過氧化氫加入正常的及過錶達H0-1的HEK293T細胞和人臍靜脈內皮細胞,檢測細胞內活性氧的含量.結果 成功篩選齣能穩定錶達H0-1的單剋隆細胞繫併擴大培養,Western blot檢測其H0-1的錶達明顯升高.加入過氧化氫後,過錶達H0-1的HEK293T細胞和人臍靜脈內皮細胞內的活性氧明顯減少.結論 成功構建瞭能穩定錶達人H0-1的細胞繫,內源性過錶達H0-1能夠對抗細胞的氧化損傷.
목적 구건은정표체인혈홍소가양매-1 (HO-1)적세포계,탐토내원성과표체HO-1대항세포양화손상적작용.방법 PCR확증HO-1기인병장기극륭지개조적만병독재체pLentiLox3.7중,구건휴대목적기인적중조질립.용중조질립전염HEK293T세포,병용Western blot검측H0-1적표체.장중조질립여만병독보조질립(plp1、plp2、VSVG)공동전염HEK293T세포,포장유활력적만병독.용휴대H0-1적만병독감염HEK293T세포,사선출능은정표체목적기인적단극륭,병행Western blot검측H0-1적표체.장과양화경가입정상적급과표체H0-1적HEK293T세포화인제정맥내피세포,검측세포내활성양적함량.결과 성공사선출능은정표체H0-1적단극륭세포계병확대배양,Western blot검측기H0-1적표체명현승고.가입과양화경후,과표체H0-1적HEK293T세포화인제정맥내피세포내적활성양명현감소.결론 성공구건료능은정표체인H0-1적세포계,내원성과표체H0-1능구대항세포적양화손상.
