CAJ | 학술논문

目的：构建YAP基因小发卡RNA（ shRNA），并转染人肺癌A549细胞株，建立稳定低表达YAP基因的肺癌细胞系。方法根据信息检索，分别构建4个shRNA（shRNA1，shRNA2，shRNA3，shRNA4）质粒表达载体和一个阴性对照表达载体（NCRNA），脂质体法转染人肺癌A549细胞株，荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达，有限稀释法建立稳定低表达YAP基因的A549细胞系，RT-PCR和Western印迹检测 YAP在该细胞中的表达。结果转染的细胞可见绿色荧光蛋白表达，RT-PCR和Western印迹检测到目的基因YAP在转染细胞中为低表达。 RT-PCR检测YAP mR-NA示shRNA1，shRNA2，shRNA3，shRNA4，NCRNA组和空白对照组的2-ΔΔct值分别为2．775，0．498，0．432，2．834，3．289，3．320。 Western印迹检测示shRNA1组，shRNA2组，shRNA3组，shRNA4，NCRNA组，空白对照组的蛋白相对灰度值分别为0．690，0．411，0．354，0．688，0．699，0．712。结论成功构建了靶向YAP基因的shRNA，筛选出了干扰作用最为明显的shRNA，并建立了稳定低表达YAP基因的A549细胞系。
목적：구건YAP기인소발잡RNA（ shRNA），병전염인폐암A549세포주，건립은정저표체YAP기인적폐암세포계。방법근거신식검색，분별구건4개shRNA（shRNA1，shRNA2，shRNA3，shRNA4）질립표체재체화일개음성대조표체재체（NCRNA），지질체법전염인폐암A549세포주，형광현미경하관찰록색형광단백적표체，유한희석법건립은정저표체YAP기인적A549세포계，RT-PCR화Western인적검측 YAP재해세포중적표체。결과전염적세포가견록색형광단백표체，RT-PCR화Western인적검측도목적기인YAP재전염세포중위저표체。 RT-PCR검측YAP mR-NA시shRNA1，shRNA2，shRNA3，shRNA4，NCRNA조화공백대조조적2-ΔΔct치분별위2．775，0．498，0．432，2．834，3．289，3．320。 Western인적검측시shRNA1조，shRNA2조，shRNA3조，shRNA4，NCRNA조，공백대조조적단백상대회도치분별위0．690，0．411，0．354，0．688，0．699，0．712。결론성공구건료파향YAP기인적shRNA，사선출료간우작용최위명현적shRNA，병건립료은정저표체YAP기인적A549세포계。