CAJ | 학술논문

番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus,ToMV)是烟草花叶病毒属(Tobamovirus)的典型成员,该病毒侵染严重影响农作物的产量和质量.ToMV-N5株系能引起番茄(Lycopersicon esculentum)主栽品种(合作903)系统性坏死,建立该株系的侵染性克隆体系是研究其致病机理的必要条件.本研究将ToMV-N5株系的基因组克隆至含35S启动子瞬时表达载体pCB301中,农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)浸润接种本氏烟(Nicotiana benthamiana)和番茄结果表明,农杆菌侵染性克隆pCB301-ToMV-N5引起本氏烟和番茄系统性坏死症状,与其病毒粒子摩擦接种所引起的症状相一致.以绿色荧光蛋白基因(green fluorescent protein,GFP)代替ToMV-N5的外壳蛋白基因(coat protein,CP)获得表达载体pCB301-ToMV-N5CP45GFP,病毒接种结果表明,ToMV-N5能高效表达GFP,在病毒浸润接种浓度(OD600)为0.002时,GFP也能够有效表达.pCB301-ToMV-N5CP45GFP缺失了CP基因使得病毒不能系统性侵染,将烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)u5株系包含CP大小为647 nt(nt 5 498～6 145)片段克隆到pCB301-ToMV-N5CP45GFP中,获得pCB301-ToMV-N5CP45GFP-CPU5,浸润接种本氏烟结果表明,病毒能长距离移动,在寄主非接种部位表达GFP;浸润及摩擦接种番茄结果表明,只能在显微镜下观察到微弱GFP,且局限于接种部位.本研究成功获得了ToMV-N5株系的农杆菌侵染性克隆及其表达载体,为研究该病毒侵染的分子机理提供了基础资料.
번가화협병독(Tomato mosaic virus,ToMV)시연초화협병독속(Tobamovirus)적전형성원,해병독침염엄중영향농작물적산량화질량.ToMV-N5주계능인기번가(Lycopersicon esculentum)주재품충(합작903)계통성배사,건립해주계적침염성극륭체계시연구기치병궤리적필요조건.본연구장ToMV-N5주계적기인조극륭지함35S계동자순시표체재체pCB301중,농간균(Agrobacterium tumefaciens)침윤접충본씨연(Nicotiana benthamiana)화번가결과표명,농간균침염성극륭pCB301-ToMV-N5인기본씨연화번가계통성배사증상,여기병독입자마찰접충소인기적증상상일치.이록색형광단백기인(green fluorescent protein,GFP)대체ToMV-N5적외각단백기인(coat protein,CP)획득표체재체pCB301-ToMV-N5CP45GFP,병독접충결과표명,ToMV-N5능고효표체GFP,재병독침윤접충농도(OD600)위0.002시,GFP야능구유효표체.pCB301-ToMV-N5CP45GFP결실료CP기인사득병독불능계통성침염,장연초화협병독(Tobacco mosaic virus,TMV)u5주계포함CP대소위647 nt(nt 5 498～6 145)편단극륭도pCB301-ToMV-N5CP45GFP중,획득pCB301-ToMV-N5CP45GFP-CPU5,침윤접충본씨연결과표명,병독능장거리이동,재기주비접충부위표체GFP;침윤급마찰접충번가결과표명,지능재현미경하관찰도미약GFP,차국한우접충부위.본연구성공획득료ToMV-N5주계적농간균침염성극륭급기표체재체,위연구해병독침염적분자궤리제공료기출자료.