农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2014年
8期
992-1000
,共9页
肖剑%王红梅%马继登%何梦楠%龙科任%蒋岸岸
肖劍%王紅梅%馬繼登%何夢楠%龍科任%蔣岸岸
초검%왕홍매%마계등%하몽남%룡과임%장안안
G蛋白偶联受体(GPR120)%CpG岛%甲基化%mRNA%脂肪
G蛋白偶聯受體(GPR120)%CpG島%甲基化%mRNA%脂肪
G단백우련수체(GPR120)%CpG도%갑기화%mRNA%지방
G-protein coupled receptor 120 (GPR120)%CpG island%Methylation%mRNA%Adipose tissue
G蛋白偶联受体120 (G-protein coupled receptor 120,GPR120)是脂肪组织中唯一高表达的一种长链不饱和脂肪酸受体,参与多种生理过程.DNA甲基化大多数发生在CpG含量丰富的区域(CpG岛),是一种介导基因在组织间差异性表达的重要表观遗传学修饰.为了研究CpG岛甲基化对GPR120在猪皮下(背部皮下)和内脏(大网)脂肪组织中mRNA表达量的影响,本实验采用qRT-PCR检测了金华猪(Sus scrofa)(6月龄和7年)不同脂肪组织中GPR120 mRNA表达量.同时,利用在线预测软件分析了GPR120的DNA全序列(从第一外显子上游5 000 bp到最后一个外显子下游5 000 bp)的CpG岛分布,采用Sequenom MassArray甲基化DNA定量分析平台检测了CpG岛在不同脂肪组织中的甲基化状态,并用亚硫酸氢钠修饰后测序法(bisulfite-sequencing PCR,BSP)对Sequenom MassArray检测结果进行了验证.结果显示,在6月龄和7年两个时间点中,皮下组织中的脂肪体积都极显著高于大网的脂肪体积(P＜0.01),同时皮下组织中的GPR120表达量极显著高于大网(P＜0.01),与脂肪体积大小趋势一致.生物信息学方法预测出GPR120的DNA序列GC含量丰富,共含有5个CpG岛,依次位于基因的不同元件:5'非编码区、第1外显子、第2内含子和3'非编码区.甲基化分析结果显示,在两个时间点中位于第2内含子的CpG岛甲基化在皮下组织中显著高于大网(P＜0.05),并BSP实验结果验证了组织间的甲基化差异,其余4个CpG岛甲基化水平在组织间差异均不显著.第2内含子的CpG岛甲基化与基因表达差异趋势一致.本实验提供了在不同组织间整个基因范围内的DNA甲基化模式,结果表明GPR120富含丰富的CpG岛,其中基因内的CpG岛甲基化与其mRNA表达量正相关.本研究为揭示GPR120在组织间差异表达的表观遗传调控提供了理论基础.
G蛋白偶聯受體120 (G-protein coupled receptor 120,GPR120)是脂肪組織中唯一高錶達的一種長鏈不飽和脂肪痠受體,參與多種生理過程.DNA甲基化大多數髮生在CpG含量豐富的區域(CpG島),是一種介導基因在組織間差異性錶達的重要錶觀遺傳學脩飾.為瞭研究CpG島甲基化對GPR120在豬皮下(揹部皮下)和內髒(大網)脂肪組織中mRNA錶達量的影響,本實驗採用qRT-PCR檢測瞭金華豬(Sus scrofa)(6月齡和7年)不同脂肪組織中GPR120 mRNA錶達量.同時,利用在線預測軟件分析瞭GPR120的DNA全序列(從第一外顯子上遊5 000 bp到最後一箇外顯子下遊5 000 bp)的CpG島分佈,採用Sequenom MassArray甲基化DNA定量分析平檯檢測瞭CpG島在不同脂肪組織中的甲基化狀態,併用亞硫痠氫鈉脩飾後測序法(bisulfite-sequencing PCR,BSP)對Sequenom MassArray檢測結果進行瞭驗證.結果顯示,在6月齡和7年兩箇時間點中,皮下組織中的脂肪體積都極顯著高于大網的脂肪體積(P＜0.01),同時皮下組織中的GPR120錶達量極顯著高于大網(P＜0.01),與脂肪體積大小趨勢一緻.生物信息學方法預測齣GPR120的DNA序列GC含量豐富,共含有5箇CpG島,依次位于基因的不同元件:5'非編碼區、第1外顯子、第2內含子和3'非編碼區.甲基化分析結果顯示,在兩箇時間點中位于第2內含子的CpG島甲基化在皮下組織中顯著高于大網(P＜0.05),併BSP實驗結果驗證瞭組織間的甲基化差異,其餘4箇CpG島甲基化水平在組織間差異均不顯著.第2內含子的CpG島甲基化與基因錶達差異趨勢一緻.本實驗提供瞭在不同組織間整箇基因範圍內的DNA甲基化模式,結果錶明GPR120富含豐富的CpG島,其中基因內的CpG島甲基化與其mRNA錶達量正相關.本研究為揭示GPR120在組織間差異錶達的錶觀遺傳調控提供瞭理論基礎.
G단백우련수체120 (G-protein coupled receptor 120,GPR120)시지방조직중유일고표체적일충장련불포화지방산수체,삼여다충생리과정.DNA갑기화대다수발생재CpG함량봉부적구역(CpG도),시일충개도기인재조직간차이성표체적중요표관유전학수식.위료연구CpG도갑기화대GPR120재저피하(배부피하)화내장(대망)지방조직중mRNA표체량적영향,본실험채용qRT-PCR검측료금화저(Sus scrofa)(6월령화7년)불동지방조직중GPR120 mRNA표체량.동시,이용재선예측연건분석료GPR120적DNA전서렬(종제일외현자상유5 000 bp도최후일개외현자하유5 000 bp)적CpG도분포,채용Sequenom MassArray갑기화DNA정량분석평태검측료CpG도재불동지방조직중적갑기화상태,병용아류산경납수식후측서법(bisulfite-sequencing PCR,BSP)대Sequenom MassArray검측결과진행료험증.결과현시,재6월령화7년량개시간점중,피하조직중적지방체적도겁현저고우대망적지방체적(P＜0.01),동시피하조직중적GPR120표체량겁현저고우대망(P＜0.01),여지방체적대소추세일치.생물신식학방법예측출GPR120적DNA서렬GC함량봉부,공함유5개CpG도,의차위우기인적불동원건:5'비편마구、제1외현자、제2내함자화3'비편마구.갑기화분석결과현시,재량개시간점중위우제2내함자적CpG도갑기화재피하조직중현저고우대망(P＜0.05),병BSP실험결과험증료조직간적갑기화차이,기여4개CpG도갑기화수평재조직간차이균불현저.제2내함자적CpG도갑기화여기인표체차이추세일치.본실험제공료재불동조직간정개기인범위내적DNA갑기화모식,결과표명GPR120부함봉부적CpG도,기중기인내적CpG도갑기화여기mRNA표체량정상관.본연구위게시GPR120재조직간차이표체적표관유전조공제공료이론기출.
