农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2014年
8期
941-948
,共8页
何玉龙%张文清%吴月红%李敏%王玉炯
何玉龍%張文清%吳月紅%李敏%王玉炯
하옥룡%장문청%오월홍%리민%왕옥형
雷帕霉素(rapamycin)%卡介苗(BCG)%NO%诱导性一氧化氮合成酶基因(iNOS)%巨噬细胞
雷帕黴素(rapamycin)%卡介苗(BCG)%NO%誘導性一氧化氮閤成酶基因(iNOS)%巨噬細胞
뢰파매소(rapamycin)%잡개묘(BCG)%NO%유도성일양화담합성매기인(iNOS)%거서세포
Rapamycin%Bacillus Calmette-Guérin (BCG)%NO%Inducible nitric oxide synthase gene(iNOS)%Macrophage
巨噬细胞产生的一氧化氮(nitric oxide,NO)在抵御及杀灭病原微生物过程中起重要作用.为了解哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路在结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染宿主巨噬细胞过程中对NO的调控作用,本研究在卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin,BCG)感染体外培养的BALB/c小鼠(Mus musculus)巨噬细胞系RAW264.7过程中添加mTOR信号通路的特异性抑制剂雷帕霉素(rapamycin),通过Griess、实时荧光定量PCR、Western blot等方法检测NO及诱导性一氧化氮合成酶基因(inducible nitric oxide synthase,iNOS) mRNA及其蛋白的表达情况,同时以脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)处理的RAW264.7细胞作为参照.结果表明,与未经处理的空白对照组相比,BCG、LPS刺激6、12和24 h可以极显著增加RAW264.7细胞中NO的产生(P＜0.01),iNOS mRNA及其蛋白水平表达极显著增加(P＜0.01).与未添加rapamycin组相比,BCG感染6和12h时,10 nmol/L rapamycin可以极显著抑制RAW264.7细胞中NO的产生及iNOS的表达(P＜0.01),但24 h时rapamycin对产生NO的抑制作用不显著(P＞0.05),但同样可以极显著抑制iNOS的表达(P＜0.01); LPS刺激6和24 h时,10 nmol/L rapamycin可以极显著抑制RAW264.7细胞中NO的产生(P＜0.01); 12 h时,显著抑制NO的产生(P＜0.05); LPS刺激时,6h时rapamycin对iNOS的表达的抑制作用不显著(P＞0.05),12和24h时极显著抑制iNOS的表达(P＜0.01).结果显示,rapamycin在MTB感染宿主巨噬细胞过程中对NO的产生有重要的调控作用,为揭示mTOR信号通路在结核病发生及发展过程中的作用提供重要的理论依据.
巨噬細胞產生的一氧化氮(nitric oxide,NO)在牴禦及殺滅病原微生物過程中起重要作用.為瞭解哺乳動物雷帕黴素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信號通路在結覈分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染宿主巨噬細胞過程中對NO的調控作用,本研究在卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin,BCG)感染體外培養的BALB/c小鼠(Mus musculus)巨噬細胞繫RAW264.7過程中添加mTOR信號通路的特異性抑製劑雷帕黴素(rapamycin),通過Griess、實時熒光定量PCR、Western blot等方法檢測NO及誘導性一氧化氮閤成酶基因(inducible nitric oxide synthase,iNOS) mRNA及其蛋白的錶達情況,同時以脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)處理的RAW264.7細胞作為參照.結果錶明,與未經處理的空白對照組相比,BCG、LPS刺激6、12和24 h可以極顯著增加RAW264.7細胞中NO的產生(P＜0.01),iNOS mRNA及其蛋白水平錶達極顯著增加(P＜0.01).與未添加rapamycin組相比,BCG感染6和12h時,10 nmol/L rapamycin可以極顯著抑製RAW264.7細胞中NO的產生及iNOS的錶達(P＜0.01),但24 h時rapamycin對產生NO的抑製作用不顯著(P＞0.05),但同樣可以極顯著抑製iNOS的錶達(P＜0.01); LPS刺激6和24 h時,10 nmol/L rapamycin可以極顯著抑製RAW264.7細胞中NO的產生(P＜0.01); 12 h時,顯著抑製NO的產生(P＜0.05); LPS刺激時,6h時rapamycin對iNOS的錶達的抑製作用不顯著(P＞0.05),12和24h時極顯著抑製iNOS的錶達(P＜0.01).結果顯示,rapamycin在MTB感染宿主巨噬細胞過程中對NO的產生有重要的調控作用,為揭示mTOR信號通路在結覈病髮生及髮展過程中的作用提供重要的理論依據.
거서세포산생적일양화담(nitric oxide,NO)재저어급살멸병원미생물과정중기중요작용.위료해포유동물뢰파매소파단백(mammalian target of rapamycin,mTOR)신호통로재결핵분지간균(Mycobacterium tuberculosis,MTB)감염숙주거서세포과정중대NO적조공작용,본연구재잡개묘(Bacillus Calmette-Guérin,BCG)감염체외배양적BALB/c소서(Mus musculus)거서세포계RAW264.7과정중첨가mTOR신호통로적특이성억제제뢰파매소(rapamycin),통과Griess、실시형광정량PCR、Western blot등방법검측NO급유도성일양화담합성매기인(inducible nitric oxide synthase,iNOS) mRNA급기단백적표체정황,동시이지다당(lipopolysaccharides,LPS)처리적RAW264.7세포작위삼조.결과표명,여미경처리적공백대조조상비,BCG、LPS자격6、12화24 h가이겁현저증가RAW264.7세포중NO적산생(P＜0.01),iNOS mRNA급기단백수평표체겁현저증가(P＜0.01).여미첨가rapamycin조상비,BCG감염6화12h시,10 nmol/L rapamycin가이겁현저억제RAW264.7세포중NO적산생급iNOS적표체(P＜0.01),단24 h시rapamycin대산생NO적억제작용불현저(P＞0.05),단동양가이겁현저억제iNOS적표체(P＜0.01); LPS자격6화24 h시,10 nmol/L rapamycin가이겁현저억제RAW264.7세포중NO적산생(P＜0.01); 12 h시,현저억제NO적산생(P＜0.05); LPS자격시,6h시rapamycin대iNOS적표체적억제작용불현저(P＞0.05),12화24h시겁현저억제iNOS적표체(P＜0.01).결과현시,rapamycin재MTB감염숙주거서세포과정중대NO적산생유중요적조공작용,위게시mTOR신호통로재결핵병발생급발전과정중적작용제공중요적이론의거.
