农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2014年
8期
933-940
,共8页
陈志胜%彭特%陈胜锋%李东升%计慧琴%王丙云%陈金顶
陳誌勝%彭特%陳勝鋒%李東升%計慧琴%王丙雲%陳金頂
진지성%팽특%진성봉%리동승%계혜금%왕병운%진금정
鸡胚胎干细胞%cNanog%cPouV%多能性%RNA干扰
鷄胚胎榦細胞%cNanog%cPouV%多能性%RNA榦擾
계배태간세포%cNanog%cPouV%다능성%RNA간우
Chicken embryonic stem cells%cNanog%cPouV%Pluripotency%RNA interference
利用稳定干扰载体pSuper-cNanog和pSuper-cPouV转染鸡(Gallus gallus)胚胎干细胞(chicken embryonic stem cells,cESCs),观察多能性相关基因cNanog和cPouV下调后cESCs的增殖特性和多能性标记的改变.Real-time PCR检测分析结果显示,cNanog和cPouV两基因的表达量从48 h开始出现显著下降趋势,并随着转染筛选时间的延长而呈现持续显著下降趋势,96 h可达65％以上(P＜0.05).下调cNanog和cPouV基因的表达后,cESCs呈现分化形态,细胞增殖速度减慢,隆起逐渐不明显,边缘不整齐.待筛选后培养至96h时,干扰cNanog基因的细胞多能性标记碱性磷酸酶(alkline phosphatase,AKP)和阶段特异性胚胎抗原1 (stage-specific embryonic antigen-1,SSEA-1)均不表达,而干扰cPouV基因的细胞中则仍有部分表达.将下调cPouV基因的cESCs再次用pSuper-cNanog转染,培养48 h多能性标记AKP和SSEA-1均不表达.结果说明,cNanog和cPouV基因在维持鸡胚胎干细胞多能性和自我更新中起重要作用,且cNanog基因占主导地位.本研究为研究家禽胚胎发育的分子机制以及家禽胚胎干细胞体外培养时自我更新和多能性维持的分子机制提供理论依据.
利用穩定榦擾載體pSuper-cNanog和pSuper-cPouV轉染鷄(Gallus gallus)胚胎榦細胞(chicken embryonic stem cells,cESCs),觀察多能性相關基因cNanog和cPouV下調後cESCs的增殖特性和多能性標記的改變.Real-time PCR檢測分析結果顯示,cNanog和cPouV兩基因的錶達量從48 h開始齣現顯著下降趨勢,併隨著轉染篩選時間的延長而呈現持續顯著下降趨勢,96 h可達65％以上(P＜0.05).下調cNanog和cPouV基因的錶達後,cESCs呈現分化形態,細胞增殖速度減慢,隆起逐漸不明顯,邊緣不整齊.待篩選後培養至96h時,榦擾cNanog基因的細胞多能性標記堿性燐痠酶(alkline phosphatase,AKP)和階段特異性胚胎抗原1 (stage-specific embryonic antigen-1,SSEA-1)均不錶達,而榦擾cPouV基因的細胞中則仍有部分錶達.將下調cPouV基因的cESCs再次用pSuper-cNanog轉染,培養48 h多能性標記AKP和SSEA-1均不錶達.結果說明,cNanog和cPouV基因在維持鷄胚胎榦細胞多能性和自我更新中起重要作用,且cNanog基因佔主導地位.本研究為研究傢禽胚胎髮育的分子機製以及傢禽胚胎榦細胞體外培養時自我更新和多能性維持的分子機製提供理論依據.
이용은정간우재체pSuper-cNanog화pSuper-cPouV전염계(Gallus gallus)배태간세포(chicken embryonic stem cells,cESCs),관찰다능성상관기인cNanog화cPouV하조후cESCs적증식특성화다능성표기적개변.Real-time PCR검측분석결과현시,cNanog화cPouV량기인적표체량종48 h개시출현현저하강추세,병수착전염사선시간적연장이정현지속현저하강추세,96 h가체65％이상(P＜0.05).하조cNanog화cPouV기인적표체후,cESCs정현분화형태,세포증식속도감만,륭기축점불명현,변연불정제.대사선후배양지96h시,간우cNanog기인적세포다능성표기감성린산매(alkline phosphatase,AKP)화계단특이성배태항원1 (stage-specific embryonic antigen-1,SSEA-1)균불표체,이간우cPouV기인적세포중칙잉유부분표체.장하조cPouV기인적cESCs재차용pSuper-cNanog전염,배양48 h다능성표기AKP화SSEA-1균불표체.결과설명,cNanog화cPouV기인재유지계배태간세포다능성화자아경신중기중요작용,차cNanog기인점주도지위.본연구위연구가금배태발육적분자궤제이급가금배태간세포체외배양시자아경신화다능성유지적분자궤제제공이론의거.
