食品科学
食品科學
식품과학
FOOD SCIENCE
2014年
15期
122-126
,共5页
刘回民%程国栋%陈方奇%郑明珠%詹冬玲%刘景圣
劉迴民%程國棟%陳方奇%鄭明珠%詹鼕玲%劉景聖
류회민%정국동%진방기%정명주%첨동령%류경골
半胱氨酸蛋白酶%突变体%原核表达%酶学性质
半胱氨痠蛋白酶%突變體%原覈錶達%酶學性質
반광안산단백매%돌변체%원핵표체%매학성질
cysteine protease%mutant%prokaryotic expression%enzymatic properties
通过对玉米半胱氨酸蛋白酶(cysteine protease from Zea mays,zmCP1)同源模建和底物对接研究发现,W308位点在木瓜蛋白酶家族(C1家族)高度保守,且位于zmCP1催化三联体残基N306位点附近,与绝大多数底物形成π-π键,可参与底物和酶活性中心的结合,是该酶的关键位点;结合Rosetta design程序设计,对W308位点进行突变,获得W308C突变体,并在大肠杆菌BL21中表达.酶学性质表征实验结果表明:突变体W308C的最适温度为55℃,最适pH 6.0;在70、80、90℃下的半衰期为75.33、57.24、40.29 min,分别是野生型的1.21、1.19、1.01倍;突变体W308C和野生型的特异性常数Kcat/Km分别为11.02、5.92 L/(μmol·min),催化活性提高了0.86倍.
通過對玉米半胱氨痠蛋白酶(cysteine protease from Zea mays,zmCP1)同源模建和底物對接研究髮現,W308位點在木瓜蛋白酶傢族(C1傢族)高度保守,且位于zmCP1催化三聯體殘基N306位點附近,與絕大多數底物形成π-π鍵,可參與底物和酶活性中心的結閤,是該酶的關鍵位點;結閤Rosetta design程序設計,對W308位點進行突變,穫得W308C突變體,併在大腸桿菌BL21中錶達.酶學性質錶徵實驗結果錶明:突變體W308C的最適溫度為55℃,最適pH 6.0;在70、80、90℃下的半衰期為75.33、57.24、40.29 min,分彆是野生型的1.21、1.19、1.01倍;突變體W308C和野生型的特異性常數Kcat/Km分彆為11.02、5.92 L/(μmol·min),催化活性提高瞭0.86倍.
통과대옥미반광안산단백매(cysteine protease from Zea mays,zmCP1)동원모건화저물대접연구발현,W308위점재목과단백매가족(C1가족)고도보수,차위우zmCP1최화삼련체잔기N306위점부근,여절대다수저물형성π-π건,가삼여저물화매활성중심적결합,시해매적관건위점;결합Rosetta design정서설계,대W308위점진행돌변,획득W308C돌변체,병재대장간균BL21중표체.매학성질표정실험결과표명:돌변체W308C적최괄온도위55℃,최괄pH 6.0;재70、80、90℃하적반쇠기위75.33、57.24、40.29 min,분별시야생형적1.21、1.19、1.01배;돌변체W308C화야생형적특이성상수Kcat/Km분별위11.02、5.92 L/(μmol·min),최화활성제고료0.86배.