广东海洋大学学报
廣東海洋大學學報
엄동해양대학학보
JOURNAL OF GUANGDONG OCEAN UNIVERSITY
2014年
3期
52-57
,共6页
陈立明%庞欢瑛%简纪常%吴灶和
陳立明%龐歡瑛%簡紀常%吳竈和
진립명%방환영%간기상%오조화
溶藻弧菌%dtd%基因克隆%原核表达%条件优化
溶藻弧菌%dtd%基因剋隆%原覈錶達%條件優化
용조호균%dtd%기인극륭%원핵표체%조건우화
Vibrio alginolyticus%dtd gene%Gene cloning%prokaryotic expression%optimization
根据NCBI数据库中已发表的溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)全基因组序列合成一对特异性引物,应用聚合酶链式反应(PCR技术)扩增溶藻弧菌HY9001菌株dtd基因,将其定向克隆到原核表达载体pET-32a构建重组表达质粒pET-DTD,并对其进行诱导温度、诱导时间、诱导IPTG浓度等条件的优化,最后探究其纯化时最佳咪唑洗脱浓度.结果表明:DTD蛋白成功表达,且其以包涵体的形式存在,在诱导温度37C、IPTG浓度0.1 mmol/L条件下诱导5h表达量最高,纯化最佳咪唑洗脱浓度为150 mmol/L.
根據NCBI數據庫中已髮錶的溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)全基因組序列閤成一對特異性引物,應用聚閤酶鏈式反應(PCR技術)擴增溶藻弧菌HY9001菌株dtd基因,將其定嚮剋隆到原覈錶達載體pET-32a構建重組錶達質粒pET-DTD,併對其進行誘導溫度、誘導時間、誘導IPTG濃度等條件的優化,最後探究其純化時最佳咪唑洗脫濃度.結果錶明:DTD蛋白成功錶達,且其以包涵體的形式存在,在誘導溫度37C、IPTG濃度0.1 mmol/L條件下誘導5h錶達量最高,純化最佳咪唑洗脫濃度為150 mmol/L.
근거NCBI수거고중이발표적용조호균(Vibrio alginolyticus)전기인조서렬합성일대특이성인물,응용취합매련식반응(PCR기술)확증용조호균HY9001균주dtd기인,장기정향극륭도원핵표체재체pET-32a구건중조표체질립pET-DTD,병대기진행유도온도、유도시간、유도IPTG농도등조건적우화,최후탐구기순화시최가미서세탈농도.결과표명:DTD단백성공표체,차기이포함체적형식존재,재유도온도37C、IPTG농도0.1 mmol/L조건하유도5h표체량최고,순화최가미서세탈농도위150 mmol/L.
