广东海洋大学学报
廣東海洋大學學報
엄동해양대학학보
JOURNAL OF GUANGDONG OCEAN UNIVERSITY
2014年
3期
47-51
,共5页
薛丽丽%庞欢瑛%黄郁葱%吴灶和%简纪常%周泽军
薛麗麗%龐歡瑛%黃鬱蔥%吳竈和%簡紀常%週澤軍
설려려%방환영%황욱총%오조화%간기상%주택군
溶藻弧%hutB基因%原核表达%优化%纯化
溶藻弧%hutB基因%原覈錶達%優化%純化
용조호%hutB기인%원핵표체%우화%순화
Vibrio alginolyticus%hutB gene%prokaryotic expression%optimization%purification
为探究溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)HY 9901血红素结合蛋白HutB作为疫苗候选抗原的可能性,采用PCR方法扩增V.alginolyticus HY9901 hutB基因全长序列,克隆到pMD18-T载体,经双酶切、连接后,定向插入到pET-28a(+)中,构建原核表达载体pET-HutB,转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达.SDS-PAGE验证后,优化诱导表达条件和纯化条件,并进行Western-blot分析.结果表明,HutB蛋白在Ecoli中诱导表达的最优条件:0.4 mmol/L IPTG,37℃诱导4h,表达的蛋白分子量与预期大小相符,主要以包涵体的形式存在,300 mmol/L咪唑洗脱时效果最佳,能与鼠抗His-tag单抗特异性结合.
為探究溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)HY 9901血紅素結閤蛋白HutB作為疫苗候選抗原的可能性,採用PCR方法擴增V.alginolyticus HY9901 hutB基因全長序列,剋隆到pMD18-T載體,經雙酶切、連接後,定嚮插入到pET-28a(+)中,構建原覈錶達載體pET-HutB,轉入大腸桿菌BL21(DE3)中進行IPTG誘導錶達.SDS-PAGE驗證後,優化誘導錶達條件和純化條件,併進行Western-blot分析.結果錶明,HutB蛋白在Ecoli中誘導錶達的最優條件:0.4 mmol/L IPTG,37℃誘導4h,錶達的蛋白分子量與預期大小相符,主要以包涵體的形式存在,300 mmol/L咪唑洗脫時效果最佳,能與鼠抗His-tag單抗特異性結閤.
위탐구용조호균(Vibrio alginolyticus)HY 9901혈홍소결합단백HutB작위역묘후선항원적가능성,채용PCR방법확증V.alginolyticus HY9901 hutB기인전장서렬,극륭도pMD18-T재체,경쌍매절、련접후,정향삽입도pET-28a(+)중,구건원핵표체재체pET-HutB,전입대장간균BL21(DE3)중진행IPTG유도표체.SDS-PAGE험증후,우화유도표체조건화순화조건,병진행Western-blot분석.결과표명,HutB단백재Ecoli중유도표체적최우조건:0.4 mmol/L IPTG,37℃유도4h,표체적단백분자량여예기대소상부,주요이포함체적형식존재,300 mmol/L미서세탈시효과최가,능여서항His-tag단항특이성결합.
