广东海洋大学学报
廣東海洋大學學報
엄동해양대학학보
JOURNAL OF GUANGDONG OCEAN UNIVERSITY
2014年
3期
41-46
,共6页
庞欢瑛%周泽军%丁燏%黄郁葱%吴灶和%简纪常
龐歡瑛%週澤軍%丁燏%黃鬱蔥%吳竈和%簡紀常
방환영%주택군%정율%황욱총%오조화%간기상
溶藻弧菌%vscO基因%Ⅲ型分泌系统%原核表达%免疫原性
溶藻弧菌%vscO基因%Ⅲ型分泌繫統%原覈錶達%免疫原性
용조호균%vscO기인%Ⅲ형분비계통%원핵표체%면역원성
Vibrio alginolyticus%vscO gene%Type Ⅲ secretion system (T3SS)%Prokaryotic expression%Immunogenicity
为探究溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)Z J03株Ⅲ型分泌系统(Type Ⅲ secretion system,T3SS)注射装置蛋白VscO作为疫苗候选抗原的可能性,根据GeneBank上登陆的溶藻弧菌VscO序列(NO.KJ179947),设计1对带酶切位点的特异性引物,PCR扩增vscO基因,序列分析结果显示,该基因全长462 bp,理论分子质量为18.430ku.将vscO基因定向插入原核表达载体pET-28a(+),构建重组表达质粒pET-vscO.用异丙基-βD-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,可在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中表达分子质量约为22 ku的VscO融合蛋白,且该蛋白主要以包涵体形式存在.VscO蛋白表达和纯化的最优条件为:0.1 mmol/LIPTG、37℃条件下诱导4h,咪唑洗脱浓度为400 mmol/L.用纯化后的融合蛋白免疫SPF级小鼠,获得高效多克隆抗体.Western-blotting结果表明,鼠抗VscO血清既能与重组VscO蛋白发生反应,也能与分离自溶藻弧菌约22 ku的天然蛋白发生反应,提示T3SS注射装置蛋白VscO可能是溶藻弧菌的重要保护性抗原之一.
為探究溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)Z J03株Ⅲ型分泌繫統(Type Ⅲ secretion system,T3SS)註射裝置蛋白VscO作為疫苗候選抗原的可能性,根據GeneBank上登陸的溶藻弧菌VscO序列(NO.KJ179947),設計1對帶酶切位點的特異性引物,PCR擴增vscO基因,序列分析結果顯示,該基因全長462 bp,理論分子質量為18.430ku.將vscO基因定嚮插入原覈錶達載體pET-28a(+),構建重組錶達質粒pET-vscO.用異丙基-βD-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導後,可在大腸桿菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中錶達分子質量約為22 ku的VscO融閤蛋白,且該蛋白主要以包涵體形式存在.VscO蛋白錶達和純化的最優條件為:0.1 mmol/LIPTG、37℃條件下誘導4h,咪唑洗脫濃度為400 mmol/L.用純化後的融閤蛋白免疫SPF級小鼠,穫得高效多剋隆抗體.Western-blotting結果錶明,鼠抗VscO血清既能與重組VscO蛋白髮生反應,也能與分離自溶藻弧菌約22 ku的天然蛋白髮生反應,提示T3SS註射裝置蛋白VscO可能是溶藻弧菌的重要保護性抗原之一.
위탐구용조호균(Vibrio alginolyticus)Z J03주Ⅲ형분비계통(Type Ⅲ secretion system,T3SS)주사장치단백VscO작위역묘후선항원적가능성,근거GeneBank상등륙적용조호균VscO서렬(NO.KJ179947),설계1대대매절위점적특이성인물,PCR확증vscO기인,서렬분석결과현시,해기인전장462 bp,이론분자질량위18.430ku.장vscO기인정향삽입원핵표체재체pET-28a(+),구건중조표체질립pET-vscO.용이병기-βD-류대반유당감(IPTG)유도후,가재대장간균(Escherichia coli)BL21(DE3)중표체분자질량약위22 ku적VscO융합단백,차해단백주요이포함체형식존재.VscO단백표체화순화적최우조건위:0.1 mmol/LIPTG、37℃조건하유도4h,미서세탈농도위400 mmol/L.용순화후적융합단백면역SPF급소서,획득고효다극륭항체.Western-blotting결과표명,서항VscO혈청기능여중조VscO단백발생반응,야능여분리자용조호균약22 ku적천연단백발생반응,제시T3SS주사장치단백VscO가능시용조호균적중요보호성항원지일.
