河南农业科学
河南農業科學
하남농업과학
JOURNAL OF HENAN AGRICULTURAL SCIENCES
2014年
7期
150-155
,共6页
蔡齐超%胡骁飞%侯玉泽%王耀%段萌琪%王方雨%邓瑞广%张改平
蔡齊超%鬍驍飛%侯玉澤%王耀%段萌琪%王方雨%鄧瑞廣%張改平
채제초%호효비%후옥택%왕요%단맹기%왕방우%산서엄%장개평
苯乙醇胺A%人工抗原%多抗血清%酶联免疫吸附法
苯乙醇胺A%人工抗原%多抗血清%酶聯免疫吸附法
분을순알A%인공항원%다항혈청%매련면역흡부법
Phenylethanolamine A%artificial antigen%polyclonal antiserum%ELISA
为合成苯乙醇胺A人工抗原,并制备出鼠源苯乙醇胺A多抗血清,采用琥珀酸酐法改造苯乙醇胺A,应用活化脂法(DCC)和碳二亚胺法(EDC)与载体蛋白相连,合成人工免疫原苯乙醇胺A-BSA和检测原苯乙醇胺A-OVA,并用紫外扫描光谱法、凝胶电泳法(SDS-PAGE)和酶联免疫吸附法(ELISA)鉴定偶联结果.结果显示,在紫外扫描光谱下,合成的免疫原在276 nm处出现最大吸收峰;SDS-PAGE电泳发现,免疫原出现明显的拖尾现象;按10 μg/只的剂量免疫小鼠,共免疫4次,每次间隔3周,最后1次免疫10 d后,断尾采血,经测定,得到的多抗血清的效价均达到1 ∶ 10 000,且1号小鼠多抗血清的敏感性最好,半数抑制浓度(IC50)为536.8 ng/mL,与其他药物的交叉反应率均小于0.5％,具有很好的特异性.成功合成了苯乙醇胺A人工抗原,并得到了敏感性高、特异性好的多抗血清.
為閤成苯乙醇胺A人工抗原,併製備齣鼠源苯乙醇胺A多抗血清,採用琥珀痠酐法改造苯乙醇胺A,應用活化脂法(DCC)和碳二亞胺法(EDC)與載體蛋白相連,閤成人工免疫原苯乙醇胺A-BSA和檢測原苯乙醇胺A-OVA,併用紫外掃描光譜法、凝膠電泳法(SDS-PAGE)和酶聯免疫吸附法(ELISA)鑒定偶聯結果.結果顯示,在紫外掃描光譜下,閤成的免疫原在276 nm處齣現最大吸收峰;SDS-PAGE電泳髮現,免疫原齣現明顯的拖尾現象;按10 μg/隻的劑量免疫小鼠,共免疫4次,每次間隔3週,最後1次免疫10 d後,斷尾採血,經測定,得到的多抗血清的效價均達到1 ∶ 10 000,且1號小鼠多抗血清的敏感性最好,半數抑製濃度(IC50)為536.8 ng/mL,與其他藥物的交扠反應率均小于0.5％,具有很好的特異性.成功閤成瞭苯乙醇胺A人工抗原,併得到瞭敏感性高、特異性好的多抗血清.
위합성분을순알A인공항원,병제비출서원분을순알A다항혈청,채용호박산항법개조분을순알A,응용활화지법(DCC)화탄이아알법(EDC)여재체단백상련,합성인공면역원분을순알A-BSA화검측원분을순알A-OVA,병용자외소묘광보법、응효전영법(SDS-PAGE)화매련면역흡부법(ELISA)감정우련결과.결과현시,재자외소묘광보하,합성적면역원재276 nm처출현최대흡수봉;SDS-PAGE전영발현,면역원출현명현적타미현상;안10 μg/지적제량면역소서,공면역4차,매차간격3주,최후1차면역10 d후,단미채혈,경측정,득도적다항혈청적효개균체도1 ∶ 10 000,차1호소서다항혈청적민감성최호,반수억제농도(IC50)위536.8 ng/mL,여기타약물적교차반응솔균소우0.5％,구유흔호적특이성.성공합성료분을순알A인공항원,병득도료민감성고、특이성호적다항혈청.
