河南农业科学
河南農業科學
하남농업과학
JOURNAL OF HENAN AGRICULTURAL SCIENCES
2014年
7期
19-22
,共4页
曹玲珑%李冬兵%熊大斌%邓利%牛洪斌%姜玉梅%尹钧
曹玲瓏%李鼕兵%熊大斌%鄧利%牛洪斌%薑玉梅%尹鈞
조령롱%리동병%웅대빈%산리%우홍빈%강옥매%윤균
小麦%硫氧还蛋白%酵母双杂%诱饵载体%自激活
小麥%硫氧還蛋白%酵母雙雜%誘餌載體%自激活
소맥%류양환단백%효모쌍잡%유이재체%자격활
wheat%Trx-h%yeast two-hybrid%bait vector%self-activation
为构建小麦h型硫氧还蛋白Trx-h酵母双杂交诱饵载体,并检测其对酵母细胞的自激活作用.利用RT-PCR扩增Ta Trx-h基因的ORF区域,并与pGBKT7载体连接构建诱饵载体pGBKT7-Trx-h,利用PEG/LiAC法转化酵母AH109后,通过表型筛选检测诱饵蛋白对酵母有无自激活作用.结果表明,含pGBKT7-Trx-h质粒的酵母在SD/-Trp-Leu培养基上能正常生长,说明诱饵载体表达产物对酵母细胞无毒性作用;在SD/-Trp-Leu-His-Ade培养基上不能生长,说明诱饵质粒无自主激活报告基因的作用.因此,可以利用该诱饵载体通过酵母双杂交方法筛选与Trx-h蛋白相互作用的蛋白.
為構建小麥h型硫氧還蛋白Trx-h酵母雙雜交誘餌載體,併檢測其對酵母細胞的自激活作用.利用RT-PCR擴增Ta Trx-h基因的ORF區域,併與pGBKT7載體連接構建誘餌載體pGBKT7-Trx-h,利用PEG/LiAC法轉化酵母AH109後,通過錶型篩選檢測誘餌蛋白對酵母有無自激活作用.結果錶明,含pGBKT7-Trx-h質粒的酵母在SD/-Trp-Leu培養基上能正常生長,說明誘餌載體錶達產物對酵母細胞無毒性作用;在SD/-Trp-Leu-His-Ade培養基上不能生長,說明誘餌質粒無自主激活報告基因的作用.因此,可以利用該誘餌載體通過酵母雙雜交方法篩選與Trx-h蛋白相互作用的蛋白.
위구건소맥h형류양환단백Trx-h효모쌍잡교유이재체,병검측기대효모세포적자격활작용.이용RT-PCR확증Ta Trx-h기인적ORF구역,병여pGBKT7재체련접구건유이재체pGBKT7-Trx-h,이용PEG/LiAC법전화효모AH109후,통과표형사선검측유이단백대효모유무자격활작용.결과표명,함pGBKT7-Trx-h질립적효모재SD/-Trp-Leu배양기상능정상생장,설명유이재체표체산물대효모세포무독성작용;재SD/-Trp-Leu-His-Ade배양기상불능생장,설명유이질립무자주격활보고기인적작용.인차,가이이용해유이재체통과효모쌍잡교방법사선여Trx-h단백상호작용적단백.
