中南大学学报（医学版）
中南大學學報（醫學版）
중남대학학보（의학판）
JOURNAL OF CENTRAL SOUTH UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCES)
2014年
8期
818-824
,共7页
胡瑛%苏欣%刘灵佳%向宇飞%余琪琪%易受南%周智广
鬍瑛%囌訢%劉靈佳%嚮宇飛%餘琪琪%易受南%週智廣
호영%소흔%류령가%향우비%여기기%역수남%주지엄
人天然CD4+CD25+调节性T细胞%体外扩增%表型标志%免疫抑制
人天然CD4+CD25+調節性T細胞%體外擴增%錶型標誌%免疫抑製
인천연CD4+CD25+조절성T세포%체외확증%표형표지%면역억제
human natural CD4+ CD25+ regulatory T cell%in vitro expansion%phenotyping%immunosuppression
目的:建立有效的体外培养扩增人天然CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的体系,并检测扩增细胞的表型及体外免疫抑制功能,为Treg应用于临床免疫治疗提供实验基础.方法:免疫磁珠分离(MACS)方法从人外周血单个核细胞中分离CD4+CD25+Treg,加入抗CD3/CD28包被磁珠刺激扩增;用台盼蓝染色法测定新鲜分选的和扩增的Treg的数量和活性,用流式细胞法检测新鲜的和扩增的Treg主要表型标志和纯度,用混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR)法检测扩增的Treg对羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酶(CFSE)标记的自体和异体的CD4+CD25-T细胞增殖的抑制作用.结果:扩增3周后Treg数目约为新鲜分选细胞数的2 000倍(由5.23×105±1.52×105扩增至1.02× 109±0.20×109),活性＞97％.扩增3周后的Treg与新鲜分选细胞保持了相似的表型特征:CD4+CD25+FoxP3+三阳细胞约占(94.22±2.12)％,与新鲜分选细胞相似.扩增3周后的Treg对自体和异体的CD4+CD25-T细胞的增殖均有明显的抑制作用,抑制率随着效靶比浓度的增高而增高(P＜0.01),而且其各浓度梯度对自体和异体CD4+CD25-T细胞的抑制率无明显差异(P＞0.05).结论:创建的分离和体外扩增人CD4+CD25+Treg的方法,可以大量扩增出高纯度且保留其免疫抑制功能的Treg,解决了Treg数目少的问题,有利于进一步的免疫研究和治疗.
目的:建立有效的體外培養擴增人天然CD4+CD25+調節性T細胞(regulatory T cell,Treg)的體繫,併檢測擴增細胞的錶型及體外免疫抑製功能,為Treg應用于臨床免疫治療提供實驗基礎.方法:免疫磁珠分離(MACS)方法從人外週血單箇覈細胞中分離CD4+CD25+Treg,加入抗CD3/CD28包被磁珠刺激擴增;用檯盼藍染色法測定新鮮分選的和擴增的Treg的數量和活性,用流式細胞法檢測新鮮的和擴增的Treg主要錶型標誌和純度,用混閤淋巴細胞反應(mixed lymphocyte reaction,MLR)法檢測擴增的Treg對羧基熒光素二醋痠鹽琥珀酰亞胺酶(CFSE)標記的自體和異體的CD4+CD25-T細胞增殖的抑製作用.結果:擴增3週後Treg數目約為新鮮分選細胞數的2 000倍(由5.23×105±1.52×105擴增至1.02× 109±0.20×109),活性＞97％.擴增3週後的Treg與新鮮分選細胞保持瞭相似的錶型特徵:CD4+CD25+FoxP3+三暘細胞約佔(94.22±2.12)％,與新鮮分選細胞相似.擴增3週後的Treg對自體和異體的CD4+CD25-T細胞的增殖均有明顯的抑製作用,抑製率隨著效靶比濃度的增高而增高(P＜0.01),而且其各濃度梯度對自體和異體CD4+CD25-T細胞的抑製率無明顯差異(P＞0.05).結論:創建的分離和體外擴增人CD4+CD25+Treg的方法,可以大量擴增齣高純度且保留其免疫抑製功能的Treg,解決瞭Treg數目少的問題,有利于進一步的免疫研究和治療.
목적:건립유효적체외배양확증인천연CD4+CD25+조절성T세포(regulatory T cell,Treg)적체계,병검측확증세포적표형급체외면역억제공능,위Treg응용우림상면역치료제공실험기출.방법:면역자주분리(MACS)방법종인외주혈단개핵세포중분리CD4+CD25+Treg,가입항CD3/CD28포피자주자격확증;용태반람염색법측정신선분선적화확증적Treg적수량화활성,용류식세포법검측신선적화확증적Treg주요표형표지화순도,용혼합림파세포반응(mixed lymphocyte reaction,MLR)법검측확증적Treg대최기형광소이작산염호박선아알매(CFSE)표기적자체화이체적CD4+CD25-T세포증식적억제작용.결과:확증3주후Treg수목약위신선분선세포수적2 000배(유5.23×105±1.52×105확증지1.02× 109±0.20×109),활성＞97％.확증3주후적Treg여신선분선세포보지료상사적표형특정:CD4+CD25+FoxP3+삼양세포약점(94.22±2.12)％,여신선분선세포상사.확증3주후적Treg대자체화이체적CD4+CD25-T세포적증식균유명현적억제작용,억제솔수착효파비농도적증고이증고(P＜0.01),이차기각농도제도대자체화이체CD4+CD25-T세포적억제솔무명현차이(P＞0.05).결론:창건적분리화체외확증인CD4+CD25+Treg적방법,가이대량확증출고순도차보류기면역억제공능적Treg,해결료Treg수목소적문제,유리우진일보적면역연구화치료.
