中南大学学报（医学版）
中南大學學報（醫學版）
중남대학학보（의학판）
JOURNAL OF CENTRAL SOUTH UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCES)
2014年
8期
764-768
,共5页
熊建军%龚帧%周小鸥%王庭%刘建云%李卫东
熊建軍%龔幀%週小鷗%王庭%劉建雲%李衛東
웅건군%공정%주소구%왕정%류건운%리위동
IPO8%启动子%报告基因
IPO8%啟動子%報告基因
IPO8%계동자%보고기인
IPO8%promoter%report gene
目的:克隆IPO8基因5'端非编码序列,探讨其转录活性.方法:应用cDNA 5'末端快速扩增(rapidamplification ofcDNA ends,5'RACE)方法定立IPO8基因转录起始点;在此基础上针对其5'端非编码区包括转录起始点在内的-3302 ～ +134区域分段进行PCR扩增,将产物克隆入荧光素酶表达载体pGL3-Basic.经酶切鉴定后,将重组质粒与内参质粒pRL-T K共转染人骨肉瘤细胞Saos-2,用双荧光素酶活性检测以确定其转录活性.结果:成功确定IPO8基因转录起始位点,酶切结果证实IPO8基因5'端非编码区6条续减片段正确插入到荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic.重组质粒转染Saos-2细胞后检测到荧光素酶的高表达(P＜0.05).结论:成功构建具有转录活性的IPO8启动子片段,为进一步研究IPO8表达调控机制奠定了基础.
目的:剋隆IPO8基因5'耑非編碼序列,探討其轉錄活性.方法:應用cDNA 5'末耑快速擴增(rapidamplification ofcDNA ends,5'RACE)方法定立IPO8基因轉錄起始點;在此基礎上針對其5'耑非編碼區包括轉錄起始點在內的-3302 ～ +134區域分段進行PCR擴增,將產物剋隆入熒光素酶錶達載體pGL3-Basic.經酶切鑒定後,將重組質粒與內參質粒pRL-T K共轉染人骨肉瘤細胞Saos-2,用雙熒光素酶活性檢測以確定其轉錄活性.結果:成功確定IPO8基因轉錄起始位點,酶切結果證實IPO8基因5'耑非編碼區6條續減片段正確插入到熒光素酶報告基因載體pGL3-Basic.重組質粒轉染Saos-2細胞後檢測到熒光素酶的高錶達(P＜0.05).結論:成功構建具有轉錄活性的IPO8啟動子片段,為進一步研究IPO8錶達調控機製奠定瞭基礎.
목적:극륭IPO8기인5'단비편마서렬,탐토기전록활성.방법:응용cDNA 5'말단쾌속확증(rapidamplification ofcDNA ends,5'RACE)방법정립IPO8기인전록기시점;재차기출상침대기5'단비편마구포괄전록기시점재내적-3302 ～ +134구역분단진행PCR확증,장산물극륭입형광소매표체재체pGL3-Basic.경매절감정후,장중조질립여내삼질립pRL-T K공전염인골육류세포Saos-2,용쌍형광소매활성검측이학정기전록활성.결과:성공학정IPO8기인전록기시위점,매절결과증실IPO8기인5'단비편마구6조속감편단정학삽입도형광소매보고기인재체pGL3-Basic.중조질립전염Saos-2세포후검측도형광소매적고표체(P＜0.05).결론:성공구건구유전록활성적IPO8계동자편단,위진일보연구IPO8표체조공궤제전정료기출.
