中南大学学报（医学版）
中南大學學報（醫學版）
중남대학학보（의학판）
JOURNAL OF CENTRAL SOUTH UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCES)
2014年
8期
757-763
,共7页
谭怡忻%李文娟%易梅%王卫%郑盼%张海静%向波%李桂源
譚怡忻%李文娟%易梅%王衛%鄭盼%張海靜%嚮波%李桂源
담이흔%리문연%역매%왕위%정반%장해정%향파%리계원
NOR1%宫颈癌%RNAi%凋亡
NOR1%宮頸癌%RNAi%凋亡
NOR1%궁경암%RNAi%조망
NOR1%cervical cancer%RNAi%apoptosis
目的:研究稳定干扰NOR1基因对官颈癌HeLa细胞系的影响.方法:采用pSUPER.neo+GFP载体构建靶向NOR1基因的shRNA干扰载体pSUPER-shNOR1-1,pSUPER-shNOR1-2以及无关序列对照载体pSUPER-scramble,通过脂质体转染HeLa细胞,经G418筛选获得稳定干扰细胞系.采用RT-PCR和Western印迹检测NOR1 mRNA和蛋白表达水平.采用MTT法测定细胞生长曲线.采用H2O2处理HeLa细胞,采用Hoechst33258染色和TUNEL法测定细胞凋亡.Western印迹检测干扰NOR1对HeLa细胞凋亡相关分子Bcl-2,caspase和聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)表达的影响.结果:稳定感染的shRNA干扰载体pSUPER-shNOR1-1和pSUPER-shNOR1-2抑制了HeLa细胞内源性NOR1的基因表达,成功构建了稳定干扰NORI基因的HeLa细胞系.MTT生长曲线测定表明:与pSUPER-scramble质粒转染细胞相比,稳定转染pSUPER-shNOR1-1和pSUPER-shNOR1-2质粒促进了HeLa细胞的活力和增殖,并抑制了H2O2诱导的HeLa细胞凋亡.Western印迹检测发现稳定干扰NOR1抑制了H2O2诱导的HeLa细胞caspase 9和PARP的活化,上调了Bcl-2蛋白的表达.结论:稳定干扰NOR1基因促进了HeLa细胞的活力与生长,并抑制了H2O2诱导的细胞凋亡,其机制与干扰NOR1表达引起抗凋亡分子Bcl-2表达增加和抑制caspase 9活化有关.
目的:研究穩定榦擾NOR1基因對官頸癌HeLa細胞繫的影響.方法:採用pSUPER.neo+GFP載體構建靶嚮NOR1基因的shRNA榦擾載體pSUPER-shNOR1-1,pSUPER-shNOR1-2以及無關序列對照載體pSUPER-scramble,通過脂質體轉染HeLa細胞,經G418篩選穫得穩定榦擾細胞繫.採用RT-PCR和Western印跡檢測NOR1 mRNA和蛋白錶達水平.採用MTT法測定細胞生長麯線.採用H2O2處理HeLa細胞,採用Hoechst33258染色和TUNEL法測定細胞凋亡.Western印跡檢測榦擾NOR1對HeLa細胞凋亡相關分子Bcl-2,caspase和聚ADP覈糖聚閤酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)錶達的影響.結果:穩定感染的shRNA榦擾載體pSUPER-shNOR1-1和pSUPER-shNOR1-2抑製瞭HeLa細胞內源性NOR1的基因錶達,成功構建瞭穩定榦擾NORI基因的HeLa細胞繫.MTT生長麯線測定錶明:與pSUPER-scramble質粒轉染細胞相比,穩定轉染pSUPER-shNOR1-1和pSUPER-shNOR1-2質粒促進瞭HeLa細胞的活力和增殖,併抑製瞭H2O2誘導的HeLa細胞凋亡.Western印跡檢測髮現穩定榦擾NOR1抑製瞭H2O2誘導的HeLa細胞caspase 9和PARP的活化,上調瞭Bcl-2蛋白的錶達.結論:穩定榦擾NOR1基因促進瞭HeLa細胞的活力與生長,併抑製瞭H2O2誘導的細胞凋亡,其機製與榦擾NOR1錶達引起抗凋亡分子Bcl-2錶達增加和抑製caspase 9活化有關.
목적:연구은정간우NOR1기인대관경암HeLa세포계적영향.방법:채용pSUPER.neo+GFP재체구건파향NOR1기인적shRNA간우재체pSUPER-shNOR1-1,pSUPER-shNOR1-2이급무관서렬대조재체pSUPER-scramble,통과지질체전염HeLa세포,경G418사선획득은정간우세포계.채용RT-PCR화Western인적검측NOR1 mRNA화단백표체수평.채용MTT법측정세포생장곡선.채용H2O2처리HeLa세포,채용Hoechst33258염색화TUNEL법측정세포조망.Western인적검측간우NOR1대HeLa세포조망상관분자Bcl-2,caspase화취ADP핵당취합매(poly ADP-ribose polymerase,PARP)표체적영향.결과:은정감염적shRNA간우재체pSUPER-shNOR1-1화pSUPER-shNOR1-2억제료HeLa세포내원성NOR1적기인표체,성공구건료은정간우NORI기인적HeLa세포계.MTT생장곡선측정표명:여pSUPER-scramble질립전염세포상비,은정전염pSUPER-shNOR1-1화pSUPER-shNOR1-2질립촉진료HeLa세포적활력화증식,병억제료H2O2유도적HeLa세포조망.Western인적검측발현은정간우NOR1억제료H2O2유도적HeLa세포caspase 9화PARP적활화,상조료Bcl-2단백적표체.결론:은정간우NOR1기인촉진료HeLa세포적활력여생장,병억제료H2O2유도적세포조망,기궤제여간우NOR1표체인기항조망분자Bcl-2표체증가화억제caspase 9활화유관.
