CAJ | 학술논문

本研究旨在构建人IK6基因过表达的慢病毒载体,观察其在THP1细胞株中的表达及对其生物学特征的影响,为研究该基因在白血病中的作用提供基础.采用RT-PCR方法获得目的基因,并与线性化慢病毒载体pGC-FU重组构建慢病毒载体pGC-FU-IK6-GFP,通过菌落PCR鉴定、测序比对分析,确定克隆的正确性.使用Lipofectamine 2000,将慢病毒载体pGC-FU-IK6-GFP转染293T细胞,测定病毒滴度后转染THP1细胞株,用流式细胞仪检测转染效率,RT-PCR检测靶细胞内IK6 mRNA表达,Western blot检测IK6-GFP融合蛋白,进一步观察THP1生物学特征的改变.结果表明,利用RT-PCR方法获得IK6目的基因并连接到线性化的慢病毒载体上,成功构建具有Amp抗性的pGC-FU-IK6-GFP质粒并转染293T细胞,获得滴度为2.0×109TU/ml的病毒.用目的质粒转染THP1细胞,转染效率可达90％.在靶细胞中检测到IK6 mRNA表达和IK6-GFP融合蛋白表达.IK6能够促进靶细胞克隆形成并且具有抑制凋亡的作用,而对细胞周期无显著影响.结论:成功构建IK6过表达的慢病毒载体,使IK6在THP1细胞株中稳定表达.对靶细胞生物学研究发现IK6极为可能干扰了正常Ikaros蛋白的抑癌作用,并存在潜在的抗凋亡作用,进而在一定程度上促进白血病细胞生长,但对细胞周期无明显影响.该研究为进一步探讨IK6在急性髓系白血病的作用奠定了基础.
본연구지재구건인IK6기인과표체적만병독재체,관찰기재THP1세포주중적표체급대기생물학특정적영향,위연구해기인재백혈병중적작용제공기출.채용RT-PCR방법획득목적기인,병여선성화만병독재체pGC-FU중조구건만병독재체pGC-FU-IK6-GFP,통과균락PCR감정、측서비대분석,학정극륭적정학성.사용Lipofectamine 2000,장만병독재체pGC-FU-IK6-GFP전염293T세포,측정병독적도후전염THP1세포주,용류식세포의검측전염효솔,RT-PCR검측파세포내IK6 mRNA표체,Western blot검측IK6-GFP융합단백,진일보관찰THP1생물학특정적개변.결과표명,이용RT-PCR방법획득IK6목적기인병련접도선성화적만병독재체상,성공구건구유Amp항성적pGC-FU-IK6-GFP질립병전염293T세포,획득적도위2.0×109TU/ml적병독.용목적질립전염THP1세포,전염효솔가체90％.재파세포중검측도IK6 mRNA표체화IK6-GFP융합단백표체.IK6능구촉진파세포극륭형성병차구유억제조망적작용,이대세포주기무현저영향.결론:성공구건IK6과표체적만병독재체,사IK6재THP1세포주중은정표체.대파세포생물학연구발현IK6겁위가능간우료정상Ikaros단백적억암작용,병존재잠재적항조망작용,진이재일정정도상촉진백혈병세포생장,단대세포주기무명현영향.해연구위진일보탐토IK6재급성수계백혈병적작용전정료기출.