贵阳医学院学报
貴暘醫學院學報
귀양의학원학보
JOURNAL OF GUIYANG MEDICAL COLLEGE
2014年
4期
466-469
,共4页
陈腾祥%霍建云%王宁%王金利%王晋星一%陈妮%陈林%崔唱%张金娟
陳騰祥%霍建雲%王寧%王金利%王晉星一%陳妮%陳林%崔唱%張金娟
진등상%곽건운%왕저%왕금리%왕진성일%진니%진림%최창%장금연
钙激活中性蛋白酶%焦点黏附激酶%细胞密度%细胞培养%蛋白水解产物
鈣激活中性蛋白酶%焦點黏附激酶%細胞密度%細胞培養%蛋白水解產物
개격활중성단백매%초점점부격매%세포밀도%세포배양%단백수해산물
calpain 2%focal adhesion kinase%cell density,cell culture%protein hydrolysate
目的:探讨细胞培养密度对乳腺癌MCF7细胞钙激活中性蛋白酶2(calpain 2)和焦点黏附蛋白(FAK)的水解及活性的影响.方法:常规培养乳腺癌细胞MCF7,分别以1×106、5×106、1×107个细胞传代于不同的6 cm皿中,培养36 h后,形成不同的培养密度(分别为低密度、正常密度和高密度),裂解细胞,提取蛋白行Western blot检测calpain 2和FAK的表达,用磷酸化抗体检测FAK的Y397位点磷酸化水平;MCF7细胞高密度培养并calpain 2抑制剂处理后,用Western blot法检测FAK水解情况和磷酸化水平.结果:不同密度培养对calpain 2的表达没有明显影响,但可影响calpain 2的水解,培养密度加大,水解程度加强;培养密度也可以影响FAK的水解模式,低密度培养细胞的FAK以较大的水解片段为主,高密度培养的FAK则以较小片段为主,高密度培养细胞FAK Y397磷酸化水平比低密度的低;给予calpain 2特异性抑制剂后,高密度培养细胞FAK大片段增多,小片段减少,其Y397位点的磷酸化水平增高.结论:细胞高密度培养可使MCF7细胞calpain 2的活性增强,FAK的水解程度加大,降低FAK的磷酸化.
目的:探討細胞培養密度對乳腺癌MCF7細胞鈣激活中性蛋白酶2(calpain 2)和焦點黏附蛋白(FAK)的水解及活性的影響.方法:常規培養乳腺癌細胞MCF7,分彆以1×106、5×106、1×107箇細胞傳代于不同的6 cm皿中,培養36 h後,形成不同的培養密度(分彆為低密度、正常密度和高密度),裂解細胞,提取蛋白行Western blot檢測calpain 2和FAK的錶達,用燐痠化抗體檢測FAK的Y397位點燐痠化水平;MCF7細胞高密度培養併calpain 2抑製劑處理後,用Western blot法檢測FAK水解情況和燐痠化水平.結果:不同密度培養對calpain 2的錶達沒有明顯影響,但可影響calpain 2的水解,培養密度加大,水解程度加彊;培養密度也可以影響FAK的水解模式,低密度培養細胞的FAK以較大的水解片段為主,高密度培養的FAK則以較小片段為主,高密度培養細胞FAK Y397燐痠化水平比低密度的低;給予calpain 2特異性抑製劑後,高密度培養細胞FAK大片段增多,小片段減少,其Y397位點的燐痠化水平增高.結論:細胞高密度培養可使MCF7細胞calpain 2的活性增彊,FAK的水解程度加大,降低FAK的燐痠化.
목적:탐토세포배양밀도대유선암MCF7세포개격활중성단백매2(calpain 2)화초점점부단백(FAK)적수해급활성적영향.방법:상규배양유선암세포MCF7,분별이1×106、5×106、1×107개세포전대우불동적6 cm명중,배양36 h후,형성불동적배양밀도(분별위저밀도、정상밀도화고밀도),렬해세포,제취단백행Western blot검측calpain 2화FAK적표체,용린산화항체검측FAK적Y397위점린산화수평;MCF7세포고밀도배양병calpain 2억제제처리후,용Western blot법검측FAK수해정황화린산화수평.결과:불동밀도배양대calpain 2적표체몰유명현영향,단가영향calpain 2적수해,배양밀도가대,수해정도가강;배양밀도야가이영향FAK적수해모식,저밀도배양세포적FAK이교대적수해편단위주,고밀도배양적FAK칙이교소편단위주,고밀도배양세포FAK Y397린산화수평비저밀도적저;급여calpain 2특이성억제제후,고밀도배양세포FAK대편단증다,소편단감소,기Y397위점적린산화수평증고.결론:세포고밀도배양가사MCF7세포calpain 2적활성증강,FAK적수해정도가대,강저FAK적린산화.
