食品与生物技术学报
食品與生物技術學報
식품여생물기술학보
JOURNAL OF FOOD SCIENCE AND BIOTECHNOLOGY
2014年
8期
870-876
,共7页
唐自钟%刘默洋%李雨霏%孙蓉%刘姗%陈惠%韩学易
唐自鐘%劉默洋%李雨霏%孫蓉%劉姍%陳惠%韓學易
당자종%류묵양%리우비%손용%류산%진혜%한학역
内切葡聚糖酶%定点突变%分离纯化%热稳定性%酶学性质%结构分析
內切葡聚糖酶%定點突變%分離純化%熱穩定性%酶學性質%結構分析
내절포취당매%정점돌변%분리순화%열은정성%매학성질%결구분석
endoglucanase%site-directed mutagenesis%separation and purification%thermostability%enzymatic properties%structure analysis
利用高酶活F-10突变株内切葡聚糖酶基因进行定点突变,对91位(K91E)和369位(K369R)氨基酸进行突变,构建突变质粒(K91E);(K369R)和(K91E/K369R),转化大肠杆菌BL21,经筛选获得突变内切葡聚糖酶基因工程菌株K91E,K369R和K91E/K369R.经IPTG诱导后,分离纯化酶学性质分析.结果表明:蛋白质相对分子质量为53 000;突变前后最适pH值未发生变化,为pH 6.8;突变体K369R和K91E/K369R的最适温度为50℃,而突变体K91E最适温度发生了很大的变化,为40℃;酶的比活力分别为202、162.8、77.9 U/mg,分别是原始酶(66U/mg)的3.0倍,2.4倍和1.2倍;三个突变酶的热稳定性有较大提高,70℃处理1h后,原始酶的活性急剧下降,剩余活力为12％,而K91E的剩余活力为36％,K369R剩余活力为30％,K91E/K369R剩余活力为41％.当经80℃处理1h后,K91E残余活力仍有22％.本研究获得了酶活性提高的内切葡聚糖酶菌株,为进一步在分子水平研究内切葡聚糖酶的功能及应用打下了基础,也为高酶活酶分子在其他高表达系统的表达提供了基础材料.
利用高酶活F-10突變株內切葡聚糖酶基因進行定點突變,對91位(K91E)和369位(K369R)氨基痠進行突變,構建突變質粒(K91E);(K369R)和(K91E/K369R),轉化大腸桿菌BL21,經篩選穫得突變內切葡聚糖酶基因工程菌株K91E,K369R和K91E/K369R.經IPTG誘導後,分離純化酶學性質分析.結果錶明:蛋白質相對分子質量為53 000;突變前後最適pH值未髮生變化,為pH 6.8;突變體K369R和K91E/K369R的最適溫度為50℃,而突變體K91E最適溫度髮生瞭很大的變化,為40℃;酶的比活力分彆為202、162.8、77.9 U/mg,分彆是原始酶(66U/mg)的3.0倍,2.4倍和1.2倍;三箇突變酶的熱穩定性有較大提高,70℃處理1h後,原始酶的活性急劇下降,剩餘活力為12％,而K91E的剩餘活力為36％,K369R剩餘活力為30％,K91E/K369R剩餘活力為41％.噹經80℃處理1h後,K91E殘餘活力仍有22％.本研究穫得瞭酶活性提高的內切葡聚糖酶菌株,為進一步在分子水平研究內切葡聚糖酶的功能及應用打下瞭基礎,也為高酶活酶分子在其他高錶達繫統的錶達提供瞭基礎材料.
이용고매활F-10돌변주내절포취당매기인진행정점돌변,대91위(K91E)화369위(K369R)안기산진행돌변,구건돌변질립(K91E);(K369R)화(K91E/K369R),전화대장간균BL21,경사선획득돌변내절포취당매기인공정균주K91E,K369R화K91E/K369R.경IPTG유도후,분리순화매학성질분석.결과표명:단백질상대분자질량위53 000;돌변전후최괄pH치미발생변화,위pH 6.8;돌변체K369R화K91E/K369R적최괄온도위50℃,이돌변체K91E최괄온도발생료흔대적변화,위40℃;매적비활력분별위202、162.8、77.9 U/mg,분별시원시매(66U/mg)적3.0배,2.4배화1.2배;삼개돌변매적열은정성유교대제고,70℃처리1h후,원시매적활성급극하강,잉여활력위12％,이K91E적잉여활력위36％,K369R잉여활력위30％,K91E/K369R잉여활력위41％.당경80℃처리1h후,K91E잔여활력잉유22％.본연구획득료매활성제고적내절포취당매균주,위진일보재분자수평연구내절포취당매적공능급응용타하료기출,야위고매활매분자재기타고표체계통적표체제공료기출재료.
