西安交通大学学报（医学版）
西安交通大學學報（醫學版）
서안교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF XI'AN JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2014年
5期
703-706,709
,共5页
陈孜%徐又佳%李光飞%张鹏%沈光思
陳孜%徐又佳%李光飛%張鵬%瀋光思
진자%서우가%리광비%장붕%침광사
SELEX技术%骨肉瘤%HER2%DNA适配体
SELEX技術%骨肉瘤%HER2%DNA適配體
SELEX기술%골육류%HER2%DNA괄배체
SELEX technology%osteosarcoma%HER2%DNA aptamer
目的 应用SELEX(system evolution of ligands by exponential enrichment)技术筛选与HER2特异性结合的寡聚核酸适配体(aptamer).方法 体外合成了长度为78个碱基并含有35个随机寡核苷酸的ssDNA文库,通过生物素-链亲和素磁珠系统分离法制备次级ssDNA文库,且经以微孔为介质的SELEX正反筛法获得了与HER2特异性结合的DNA适配体;同时利用生物素-链霉亲和素-辣根过氧化物酶系统检测每轮ssDNA与靶蛋白HER2的亲和力,将亲和力最高的适配体群进行克隆、测序.最后利用生物学软件DNAMAN对适配体群进行了一级结构和二级结构的分析,同时将亲和性最高的适配体做了进一步的特异性的检验.结果 经过12轮的筛选,获得了与HER2蛋白具有极高亲和力的适配体9号,亲和力从初始的0.18上升至o.86,提高了约5倍.特异性结果显示,9号适配体只与HER2具有较高的特异性.结论 经过多轮的筛选,成功获得了特异性识别骨肉瘤HER2蛋白的单链DNA适配体,为骨肉瘤的诊断和治疗奠定了基础.
目的 應用SELEX(system evolution of ligands by exponential enrichment)技術篩選與HER2特異性結閤的寡聚覈痠適配體(aptamer).方法 體外閤成瞭長度為78箇堿基併含有35箇隨機寡覈苷痠的ssDNA文庫,通過生物素-鏈親和素磁珠繫統分離法製備次級ssDNA文庫,且經以微孔為介質的SELEX正反篩法穫得瞭與HER2特異性結閤的DNA適配體;同時利用生物素-鏈黴親和素-辣根過氧化物酶繫統檢測每輪ssDNA與靶蛋白HER2的親和力,將親和力最高的適配體群進行剋隆、測序.最後利用生物學軟件DNAMAN對適配體群進行瞭一級結構和二級結構的分析,同時將親和性最高的適配體做瞭進一步的特異性的檢驗.結果 經過12輪的篩選,穫得瞭與HER2蛋白具有極高親和力的適配體9號,親和力從初始的0.18上升至o.86,提高瞭約5倍.特異性結果顯示,9號適配體隻與HER2具有較高的特異性.結論 經過多輪的篩選,成功穫得瞭特異性識彆骨肉瘤HER2蛋白的單鏈DNA適配體,為骨肉瘤的診斷和治療奠定瞭基礎.
목적 응용SELEX(system evolution of ligands by exponential enrichment)기술사선여HER2특이성결합적과취핵산괄배체(aptamer).방법 체외합성료장도위78개감기병함유35개수궤과핵감산적ssDNA문고,통과생물소-련친화소자주계통분리법제비차급ssDNA문고,차경이미공위개질적SELEX정반사법획득료여HER2특이성결합적DNA괄배체;동시이용생물소-련매친화소-랄근과양화물매계통검측매륜ssDNA여파단백HER2적친화력,장친화력최고적괄배체군진행극륭、측서.최후이용생물학연건DNAMAN대괄배체군진행료일급결구화이급결구적분석,동시장친화성최고적괄배체주료진일보적특이성적검험.결과 경과12륜적사선,획득료여HER2단백구유겁고친화력적괄배체9호,친화력종초시적0.18상승지o.86,제고료약5배.특이성결과현시,9호괄배체지여HER2구유교고적특이성.결론 경과다륜적사선,성공획득료특이성식별골육류HER2단백적단련DNA괄배체,위골육류적진단화치료전정료기출.
