广东农业科学
廣東農業科學
엄동농업과학
GUANGDONG AGRICULTURAL SCIENCES
2014年
17期
124-128,144
,共6页
徐育强%张开岳%张勇%蒋骄云%冯龙%许世杰%曲宪成
徐育彊%張開嶽%張勇%蔣驕雲%馮龍%許世傑%麯憲成
서육강%장개악%장용%장교운%풍룡%허세걸%곡헌성
磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶%抑制差减杂交%快速扩增cDNA末端%LR型微囊藻毒素
燐痠烯醇式丙酮痠羧激酶%抑製差減雜交%快速擴增cDNA末耑%LR型微囊藻毒素
린산희순식병동산최격매%억제차감잡교%쾌속확증cDNA말단%LR형미낭조독소
在前期经LR型微囊藻毒素(MC-LR)处理后建立鲢鱼肝脏组织抑制差减杂交文库的基础上,利用RACE方法克隆了经MC-LR处理后差异表达明显的鲢鱼磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶PEPCK基因cDNA全长,并对其进行了序列分析,然后通过半定量分析了经MC-LR投与1、5、10 h鲢鱼肝脏组织PEPCK表达水平.结果显示:鲢鱼PEPCK基因cDNA全长2 605 bp,包括101 bp的5 '端非翻译区、564 bp的3 '端非翻译区、1 911 bp的开放阅读框,编码636个氨基酸.将鲢鱼PEPCK基因cDNA核酸及氨基酸序列与GenBank中已发表的其他几种鱼类的相应序列进行比对,表明鲢鱼PEPCK与翘嘴红鲌的同源性最高,其核酸及氨基酸序列的相似性分别达到97%和99%;其次为斑马鱼,同源性均达到90%以上;与星斑川鲽的同源性最差,但核酸及氨基酸序列的相似性也分别达到77%和84%,说明鱼类PEPCK在长期的进化过程中具有很高的保守性.鲢鱼PEPCK具有与草酰乙酯结合的特有结构域以及与GTP三磷酸链结合的激酶1和激酶2基序.另外,鲢鱼投予MC-LR后,肝脏组织PEPCK经过1、5、10 h的表达量均有显著升高,说明鲢鱼投予MC-LR 1 h内该基因即被诱导表达,且在10 h内皆维持较高的表达水平.这与微囊藻毒素作用有关,推测与微囊藻毒素解毒过程相关.
在前期經LR型微囊藻毒素(MC-LR)處理後建立鰱魚肝髒組織抑製差減雜交文庫的基礎上,利用RACE方法剋隆瞭經MC-LR處理後差異錶達明顯的鰱魚燐痠烯醇式丙酮痠羧激酶PEPCK基因cDNA全長,併對其進行瞭序列分析,然後通過半定量分析瞭經MC-LR投與1、5、10 h鰱魚肝髒組織PEPCK錶達水平.結果顯示:鰱魚PEPCK基因cDNA全長2 605 bp,包括101 bp的5 '耑非翻譯區、564 bp的3 '耑非翻譯區、1 911 bp的開放閱讀框,編碼636箇氨基痠.將鰱魚PEPCK基因cDNA覈痠及氨基痠序列與GenBank中已髮錶的其他幾種魚類的相應序列進行比對,錶明鰱魚PEPCK與翹嘴紅鲌的同源性最高,其覈痠及氨基痠序列的相似性分彆達到97%和99%;其次為斑馬魚,同源性均達到90%以上;與星斑川鰈的同源性最差,但覈痠及氨基痠序列的相似性也分彆達到77%和84%,說明魚類PEPCK在長期的進化過程中具有很高的保守性.鰱魚PEPCK具有與草酰乙酯結閤的特有結構域以及與GTP三燐痠鏈結閤的激酶1和激酶2基序.另外,鰱魚投予MC-LR後,肝髒組織PEPCK經過1、5、10 h的錶達量均有顯著升高,說明鰱魚投予MC-LR 1 h內該基因即被誘導錶達,且在10 h內皆維持較高的錶達水平.這與微囊藻毒素作用有關,推測與微囊藻毒素解毒過程相關.
재전기경LR형미낭조독소(MC-LR)처리후건립련어간장조직억제차감잡교문고적기출상,이용RACE방법극륭료경MC-LR처리후차이표체명현적련어린산희순식병동산최격매PEPCK기인cDNA전장,병대기진행료서렬분석,연후통과반정량분석료경MC-LR투여1、5、10 h련어간장조직PEPCK표체수평.결과현시:련어PEPCK기인cDNA전장2 605 bp,포괄101 bp적5 '단비번역구、564 bp적3 '단비번역구、1 911 bp적개방열독광,편마636개안기산.장련어PEPCK기인cDNA핵산급안기산서렬여GenBank중이발표적기타궤충어류적상응서렬진행비대,표명련어PEPCK여교취홍백적동원성최고,기핵산급안기산서렬적상사성분별체도97%화99%;기차위반마어,동원성균체도90%이상;여성반천접적동원성최차,단핵산급안기산서렬적상사성야분별체도77%화84%,설명어류PEPCK재장기적진화과정중구유흔고적보수성.련어PEPCK구유여초선을지결합적특유결구역이급여GTP삼린산련결합적격매1화격매2기서.령외,련어투여MC-LR후,간장조직PEPCK경과1、5、10 h적표체량균유현저승고,설명련어투여MC-LR 1 h내해기인즉피유도표체,차재10 h내개유지교고적표체수평.저여미낭조독소작용유관,추측여미낭조독소해독과정상관.