泸州医学院学报
瀘州醫學院學報
로주의학원학보
JOURNAL OF LUZHOU MEDICAL COLLEGE
2014年
4期
345-348
,共4页
曹新梅%张岱权%夏纪毅%王栩
曹新梅%張岱權%夏紀毅%王栩
조신매%장대권%하기의%왕허
C-erbB-2%shRNA%Lewis细胞%凋亡
C-erbB-2%shRNA%Lewis細胞%凋亡
C-erbB-2%shRNA%Lewis세포%조망
目的:探讨shRNA抑制C-erbB-2基因表达对小鼠肺腺癌Lewis细胞凋亡的影响.方法:构建4个pGPU6/RFP/Neo-erbB-2质粒和pGPU6/RFP/Neo-shNC.应用Lipofectamine 2000转染pGPU6/RFP/Neo-shNC至小鼠肺腺癌Lewis细胞,应用荧光显微镜观察荧光,确定最佳转染效率.应用RT-PCR检测C-erbB-2 mRNA的水平,应用Western blotting检测该蛋白的表达,筛选干扰效果最好的质粒.应用流式细胞术检测空白组、pGPU6/RFP/Neo-shNC组和最佳干扰组细胞的凋亡率.结果:pGPU6/RFP/Neo-shNC(μg)∶Lipofectamine (μl)为0.4∶1时,转染效果最好.4个pGPU6/RFP/Neo-erbB-2质粒均能降低C-erbB-2 mRNA水平和蛋白的表达,其中干扰效果最好的是pGPU6/RFP/Neo-erbB-2-mus-3669,用于后续实验.pGPU6/RFP/Neo-erbB-2-mus-3669质粒组的凋亡率高于空白组和pGPU6/RFP/Neo-shNC组(P＜0.05).结论:pGPU6/RFP/Neo-erbB-2-mus-3669质粒能抑制小鼠Lewis细胞C-erbB-2基因的表达,诱导细胞凋亡.
目的:探討shRNA抑製C-erbB-2基因錶達對小鼠肺腺癌Lewis細胞凋亡的影響.方法:構建4箇pGPU6/RFP/Neo-erbB-2質粒和pGPU6/RFP/Neo-shNC.應用Lipofectamine 2000轉染pGPU6/RFP/Neo-shNC至小鼠肺腺癌Lewis細胞,應用熒光顯微鏡觀察熒光,確定最佳轉染效率.應用RT-PCR檢測C-erbB-2 mRNA的水平,應用Western blotting檢測該蛋白的錶達,篩選榦擾效果最好的質粒.應用流式細胞術檢測空白組、pGPU6/RFP/Neo-shNC組和最佳榦擾組細胞的凋亡率.結果:pGPU6/RFP/Neo-shNC(μg)∶Lipofectamine (μl)為0.4∶1時,轉染效果最好.4箇pGPU6/RFP/Neo-erbB-2質粒均能降低C-erbB-2 mRNA水平和蛋白的錶達,其中榦擾效果最好的是pGPU6/RFP/Neo-erbB-2-mus-3669,用于後續實驗.pGPU6/RFP/Neo-erbB-2-mus-3669質粒組的凋亡率高于空白組和pGPU6/RFP/Neo-shNC組(P＜0.05).結論:pGPU6/RFP/Neo-erbB-2-mus-3669質粒能抑製小鼠Lewis細胞C-erbB-2基因的錶達,誘導細胞凋亡.
목적:탐토shRNA억제C-erbB-2기인표체대소서폐선암Lewis세포조망적영향.방법:구건4개pGPU6/RFP/Neo-erbB-2질립화pGPU6/RFP/Neo-shNC.응용Lipofectamine 2000전염pGPU6/RFP/Neo-shNC지소서폐선암Lewis세포,응용형광현미경관찰형광,학정최가전염효솔.응용RT-PCR검측C-erbB-2 mRNA적수평,응용Western blotting검측해단백적표체,사선간우효과최호적질립.응용류식세포술검측공백조、pGPU6/RFP/Neo-shNC조화최가간우조세포적조망솔.결과:pGPU6/RFP/Neo-shNC(μg)∶Lipofectamine (μl)위0.4∶1시,전염효과최호.4개pGPU6/RFP/Neo-erbB-2질립균능강저C-erbB-2 mRNA수평화단백적표체,기중간우효과최호적시pGPU6/RFP/Neo-erbB-2-mus-3669,용우후속실험.pGPU6/RFP/Neo-erbB-2-mus-3669질립조적조망솔고우공백조화pGPU6/RFP/Neo-shNC조(P＜0.05).결론:pGPU6/RFP/Neo-erbB-2-mus-3669질립능억제소서Lewis세포C-erbB-2기인적표체,유도세포조망.
