茶叶科学
茶葉科學
다협과학
2014年
5期
481-488
,共8页
茶树%4300 DNA分析系统%SSR-PCR
茶樹%4300 DNA分析繫統%SSR-PCR
다수%4300 DNA분석계통%SSR-PCR
tea plant%4300 DNA Analysis System%SSR-PCR
简单序列重复（Simple sequence repeats, SSR）在茶树遗传与育种研究中具有重要的作用，基于4300 DNA 分析系统的 SSR 发掘具有通量高、准确和灵敏等特点，已被用于许多物种的分子标记研究，但在茶树的相关研究中尚未见报道。本研究应用单因素试验和L9(34)正交设计试验对影响茶树SSR-PCR的主要参数进行优化，建立了适合于4300 DNA 分析系统的茶树 SSR-PCR 反应体系：1.0μL DNA（25 ng·μL-1），0.2μL M13F-F、0.2μL R和0.4μL IR-M13F，0.8μL dNTPs（25 mmol·L-1），1.0μL 10×Buffer（含Mg2+），0.1μL Ex-Taq 聚合酶（5 U·μL-1），无菌水定容至10μL。所有引物浓度均为1μmol·L-1。同时，本研究还证明，可以以自行配制的6.5%聚丙烯酰胺凝胶溶液（acry∶bis=29∶1）替代4300 DNA分析系统指定凝胶溶液，检测SSR位点。
簡單序列重複（Simple sequence repeats, SSR）在茶樹遺傳與育種研究中具有重要的作用，基于4300 DNA 分析繫統的 SSR 髮掘具有通量高、準確和靈敏等特點，已被用于許多物種的分子標記研究，但在茶樹的相關研究中尚未見報道。本研究應用單因素試驗和L9(34)正交設計試驗對影響茶樹SSR-PCR的主要參數進行優化，建立瞭適閤于4300 DNA 分析繫統的茶樹 SSR-PCR 反應體繫：1.0μL DNA（25 ng·μL-1），0.2μL M13F-F、0.2μL R和0.4μL IR-M13F，0.8μL dNTPs（25 mmol·L-1），1.0μL 10×Buffer（含Mg2+），0.1μL Ex-Taq 聚閤酶（5 U·μL-1），無菌水定容至10μL。所有引物濃度均為1μmol·L-1。同時，本研究還證明，可以以自行配製的6.5%聚丙烯酰胺凝膠溶液（acry∶bis=29∶1）替代4300 DNA分析繫統指定凝膠溶液，檢測SSR位點。
간단서렬중복（Simple sequence repeats, SSR）재다수유전여육충연구중구유중요적작용，기우4300 DNA 분석계통적 SSR 발굴구유통량고、준학화령민등특점，이피용우허다물충적분자표기연구，단재다수적상관연구중상미견보도。본연구응용단인소시험화L9(34)정교설계시험대영향다수SSR-PCR적주요삼수진행우화，건립료괄합우4300 DNA 분석계통적다수 SSR-PCR 반응체계：1.0μL DNA（25 ng·μL-1），0.2μL M13F-F、0.2μL R화0.4μL IR-M13F，0.8μL dNTPs（25 mmol·L-1），1.0μL 10×Buffer（함Mg2+），0.1μL Ex-Taq 취합매（5 U·μL-1），무균수정용지10μL。소유인물농도균위1μmol·L-1。동시，본연구환증명，가이이자행배제적6.5%취병희선알응효용액（acry∶bis=29∶1）체대4300 DNA분석계통지정응효용액，검측SSR위점。
Simple sequence repeats (SSR) play an important role in genetic and breeding research for tea plant [Camellia sinensis (L.) O. Kuntze]. 4300 DNA Analysis System is high-throughput, accurate and sensitive in detecting the signals, it has been used in molecular markers techniques in many species, but its application in tea plant has not been reported up to now. In this study, the main parameters that affect tea SSR-PCR have been optimized and verified via single factor experiment and L9(34) orthogonal test. A suitable SSR-PCR reaction system of the 4300 DNA Analysis System for the tea plant genetic research was obtained:1.0μL DNA(25 ng·μL-1), 0.2μL MF-F, 0.2μL R and 0.40μL IR-MF, 0.8μL of dNTPs (25 mmol·L-1), 1.0μL 10×Buffer (Mg2+), 0.1μL Ex-Taq polymerase (5 U·μL-1), adding sterile water to a total volume of 10 μL. Concentration of all primers is 1 μmol·L-1. Besides, in this research, polyacrylamide gel solution (acry∶bis is 29∶1, concentration is 6.5%) self-made is detected to be alternative to the gel solution provided by 4300 DNA analysis system for detecting SSR loci.
