天津科技大学学报
天津科技大學學報
천진과기대학학보
JOURNAL OF TIANJIN UNIVERSITY OF SCIENCE & TECHNOLOGY
2014年
5期
24-28
,共5页
格日勒%申雁冰%任佳佳%汤睿%王敏
格日勒%申雁冰%任佳佳%湯睿%王敏
격일륵%신안빙%임가가%탕예%왕민
胆固醇7,8-脱氢酶基因daf-36%基因克隆%大肠杆菌%蛋白质表达
膽固醇7,8-脫氫酶基因daf-36%基因剋隆%大腸桿菌%蛋白質錶達
담고순7,8-탈경매기인daf-36%기인극륭%대장간균%단백질표체
cholesterol 7,8-dehydrogenase gene daf-36%gene cloning%E.coli%protein expression
胆固醇7，8-脱氢酶是参与胆固醇代谢的还原酶，可以将胆固醇转化为7-脱氢胆固醇(合成维生素D3的重要中间体)．合成秀丽隐杆线虫的胆固醇7，8-脱氢酶基因daf-36，与具有T7强启动子的载体pET32a(+)连接后，成功构建pET32a-daf-36表达质粒，转入大肠杆菌表达系统E. coli BL21(DE3)和E. coli Rosetta(DE3)，经过IPTG诱导培养，蛋白质电泳图谱及质谱结果表明此酶得到了高效表达．
膽固醇7，8-脫氫酶是參與膽固醇代謝的還原酶，可以將膽固醇轉化為7-脫氫膽固醇(閤成維生素D3的重要中間體)．閤成秀麗隱桿線蟲的膽固醇7，8-脫氫酶基因daf-36，與具有T7彊啟動子的載體pET32a(+)連接後，成功構建pET32a-daf-36錶達質粒，轉入大腸桿菌錶達繫統E. coli BL21(DE3)和E. coli Rosetta(DE3)，經過IPTG誘導培養，蛋白質電泳圖譜及質譜結果錶明此酶得到瞭高效錶達．
담고순7，8-탈경매시삼여담고순대사적환원매，가이장담고순전화위7-탈경담고순(합성유생소D3적중요중간체)．합성수려은간선충적담고순7，8-탈경매기인daf-36，여구유T7강계동자적재체pET32a(+)련접후，성공구건pET32a-daf-36표체질립，전입대장간균표체계통E. coli BL21(DE3)화E. coli Rosetta(DE3)，경과IPTG유도배양，단백질전영도보급질보결과표명차매득도료고효표체．
Cholesterol 7,8-dehydrogenase DAF-36 is a key enzyme involved in cholesterol metabolism. In this study,daf-36 gene from Caenorhabditis elegans was synthesized. The subcloned daf-36 pET-32a(+)was to construct the expression plasmid pET32a-daf-36. The recombined plasmid was then transformed into E.coli BL21(DE3)and E. coli Rosetta(DE3). The results of SDS-PAGE and MS showed that the enzyme could be efficiently expressed in the recombined bacteria after being induced by IPTG.
