CAJ | 학술논문

为探讨发酵床垫料中微生物16S rDNA基因扩增实验中诸多因素对实验结果的影响，采用单因素法对16S rDNA基因扩增时PCR反应体系中的5个潜在因素（Mg2+、dNTP、引物、Taq酶、模板DNA）5水平上进行优化实验，并进一步优化了反应程序中的退火温度、循环次数。结果表明：25μL的最佳反应体系为：10×PCR buffer 2.5μL、MgCl22.0 mmol·L-1、dNTP 0.2 mmol·L-1、引物0.2μmol·L-1、Taq DNA聚合酶0.5 U、模板DNA 50 ng；最佳反应程序为：在94℃下进行4 min预变性；随后循环扩增25个循环（包括94℃变性45 s，53.7℃退火30 s，72℃延伸90 s）；最后在72℃下延伸10 min。
위탐토발효상점료중미생물16S rDNA기인확증실험중제다인소대실험결과적영향，채용단인소법대16S rDNA기인확증시PCR반응체계중적5개잠재인소（Mg2+、dNTP、인물、Taq매、모판DNA）5수평상진행우화실험，병진일보우화료반응정서중적퇴화온도、순배차수。결과표명：25μL적최가반응체계위：10×PCR buffer 2.5μL、MgCl22.0 mmol·L-1、dNTP 0.2 mmol·L-1、인물0.2μmol·L-1、Taq DNA취합매0.5 U、모판DNA 50 ng；최가반응정서위：재94℃하진행4 min예변성；수후순배확증25개순배（포괄94℃변성45 s，53.7℃퇴화30 s，72℃연신90 s）；최후재72℃하연신10 min。
In order to study the influence of several potential factors on 16S rDNA PCR reaction conditions in fermentation bed padding mate-rial, five factors(Mg2+, dNTP, primer, Taq DNA polymerase and DNA template)were optimized by single factor experiment at 5 concentration levels. Annealing temperatures and amplification cycle numbers were also optimized. The results showed that the optimum 25 μL reaction system comprised 10 ×PCR buffer 25μL, MgCl2 2.0 mmol·L-1, dNTP 0.2 mmol·L-1, primer 0.2μmol·L-1, Taq DNA polymerase 0.5 U and DNA template 50 ng;and the optimum PCR procedure was as an initial pre-denaturing at 94℃for 4 min, which preceded 25 cycles of dena-turing at 94℃for 45 s, annealing at 53.7℃for 30 s, and extension at 72℃for 90 s, with a final extension at 72℃for 10 min.