食品与生物技术学报
食品與生物技術學報
식품여생물기술학보
JOURNAL OF FOOD SCIENCE AND BIOTECHNOLOGY
2014年
9期
910-916
,共7页
余涛%胡蝶%邬敏辰%汪俊卿%冯峰%顾颖
餘濤%鬍蝶%鄔敏辰%汪俊卿%馮峰%顧穎
여도%호접%오민신%왕준경%풍봉%고영
葡萄糖脱氢酶%酶学性质%羰基还原酶%辅酶循环%生物催化
葡萄糖脫氫酶%酶學性質%羰基還原酶%輔酶循環%生物催化
포도당탈경매%매학성질%탄기환원매%보매순배%생물최화
Glucose 1-dehydrogenase%enzymatic characterization%carbonyl reductase%coenzyme cycle%biocatalysis
为解决生物催化氧化还原反应中辅酶循环问题,人工合成密码子优化后的嗜酸热源体Thermoplasma acidophilum葡萄糖脱氢酶基因Sygdh,于E.coli BL21 (DE3)中表达,粗酶液经镍柱亲和层析获得纯化的重组葡萄糖脱氢酶SyGDH.SDS-PAGE显示相对分子质量为41.0 kDa.酶学性质分析表明:该酶的最适pH值为7.5,在pH 6.0～8.0稳定;最适反应温度为40℃,在55℃以下稳定;最适条件下其比活性达4.5 U/mg; Zn2+对其有明显激活作用;该酶对NADP+的亲和力大于NAD+且对大多数有机溶剂有良好的耐受性;对D-葡萄糖的Km和Vmax值分别为28.2 mmol/L和6.5 U/mg.在葡萄糖脱氢酶与羰基还原酶偶联构建的NADPH辅酶循环体系中,以4-氯乙酰乙酸乙酯为底物,羰基还原酶催化产物4-氯-3-羟基丁酸乙酯的产率为99.0％,是未添加葡萄糖脱氢酶时产物产率的3.11倍,表明重组SyGDH具有为生物催化氧化还原反应提供辅酶NADPH再生的能力.
為解決生物催化氧化還原反應中輔酶循環問題,人工閤成密碼子優化後的嗜痠熱源體Thermoplasma acidophilum葡萄糖脫氫酶基因Sygdh,于E.coli BL21 (DE3)中錶達,粗酶液經鎳柱親和層析穫得純化的重組葡萄糖脫氫酶SyGDH.SDS-PAGE顯示相對分子質量為41.0 kDa.酶學性質分析錶明:該酶的最適pH值為7.5,在pH 6.0～8.0穩定;最適反應溫度為40℃,在55℃以下穩定;最適條件下其比活性達4.5 U/mg; Zn2+對其有明顯激活作用;該酶對NADP+的親和力大于NAD+且對大多數有機溶劑有良好的耐受性;對D-葡萄糖的Km和Vmax值分彆為28.2 mmol/L和6.5 U/mg.在葡萄糖脫氫酶與羰基還原酶偶聯構建的NADPH輔酶循環體繫中,以4-氯乙酰乙痠乙酯為底物,羰基還原酶催化產物4-氯-3-羥基丁痠乙酯的產率為99.0％,是未添加葡萄糖脫氫酶時產物產率的3.11倍,錶明重組SyGDH具有為生物催化氧化還原反應提供輔酶NADPH再生的能力.
위해결생물최화양화환원반응중보매순배문제,인공합성밀마자우화후적기산열원체Thermoplasma acidophilum포도당탈경매기인Sygdh,우E.coli BL21 (DE3)중표체,조매액경얼주친화층석획득순화적중조포도당탈경매SyGDH.SDS-PAGE현시상대분자질량위41.0 kDa.매학성질분석표명:해매적최괄pH치위7.5,재pH 6.0～8.0은정;최괄반응온도위40℃,재55℃이하은정;최괄조건하기비활성체4.5 U/mg; Zn2+대기유명현격활작용;해매대NADP+적친화력대우NAD+차대대다수유궤용제유량호적내수성;대D-포도당적Km화Vmax치분별위28.2 mmol/L화6.5 U/mg.재포도당탈경매여탄기환원매우련구건적NADPH보매순배체계중,이4-록을선을산을지위저물,탄기환원매최화산물4-록-3-간기정산을지적산솔위99.0％,시미첨가포도당탈경매시산물산솔적3.11배,표명중조SyGDH구유위생물최화양화환원반응제공보매NADPH재생적능력.
