南方农业学报
南方農業學報
남방농업학보
GUANGXI AGRICULTURAL SCIENCES
2014年
8期
1333-1339
,共7页
滕峥%李鸣%崔永祯%方位宽%梁朝旭%何姗珊%梁俊%吴凯朝%叶燕萍
滕崢%李鳴%崔永禎%方位寬%樑朝旭%何姍珊%樑俊%吳凱朝%葉燕萍
등쟁%리명%최영정%방위관%량조욱%하산산%량준%오개조%협연평
农杆菌介导%冷调节基因%甘蔗遗传转化体系%建立
農桿菌介導%冷調節基因%甘蔗遺傳轉化體繫%建立
농간균개도%랭조절기인%감자유전전화체계%건립
Agrobacterium tumefaciens-mediated%cold regulated gene%sugarcane genetic transformation system%establishment
[目的]利用农杆菌介导法,将外源冷调节基因Cbcor15a导入甘蔗愈伤组织,建立快速、高效的甘蔗遗传转化体系,为培育具抗寒性甘蔗品种奠定基础.[方法]以新台糖22号(ROC22)为材料,通过对愈伤组织诱导、分化、生根等培养基进行优化,筛选出外源基因转化甘蔗的适合激素种类与用量、PPT用量、抗生素种类与用量;利用甘蔗转基因二元植物表达载体pCambia1300-Cbcor15a-bar,通过农杆菌介导法将目的基因Cbcor15a导入甘蔗愈伤组织.[结果]当农杆菌菌液OD600为0.4、侵染20 min时有利于愈伤组织分化;甘蔗愈伤组织诱导和分化培养阶段的最佳PPT为0.50mg/L.侵染后在共培养中添加500.00 mg/L抗生素Cef能有效抑制农杆菌,添加300.00 mg/L抗生素Cef能促进愈伤组织分化成苗,添加200.00 mg/L抗生素Cef能促进幼苗生根.MS培养基中添加低量NAA更有利于甘蔗愈伤组织的分化;在促进细胞分裂时KT的效果明显优于6-BA.MS培养基中添加5.00 mg/L NAA和70.00 g/L蔗糖能有效促进分化苗生根.利用建立的遗传转化体系可获得286株转冷调节基因Cbcor1 5a的甘蔗转化植株;选取83株通过PPT抗性筛选后长势良好的转化植株进行阳性检测,其中有4株呈阳性.[结论]利用农杆菌介导的Cbcor15a基因转化甘蔗的遗传转化体系能成功将Cbcor15基因整合到甘蔗基因组.
[目的]利用農桿菌介導法,將外源冷調節基因Cbcor15a導入甘蔗愈傷組織,建立快速、高效的甘蔗遺傳轉化體繫,為培育具抗寒性甘蔗品種奠定基礎.[方法]以新檯糖22號(ROC22)為材料,通過對愈傷組織誘導、分化、生根等培養基進行優化,篩選齣外源基因轉化甘蔗的適閤激素種類與用量、PPT用量、抗生素種類與用量;利用甘蔗轉基因二元植物錶達載體pCambia1300-Cbcor15a-bar,通過農桿菌介導法將目的基因Cbcor15a導入甘蔗愈傷組織.[結果]噹農桿菌菌液OD600為0.4、侵染20 min時有利于愈傷組織分化;甘蔗愈傷組織誘導和分化培養階段的最佳PPT為0.50mg/L.侵染後在共培養中添加500.00 mg/L抗生素Cef能有效抑製農桿菌,添加300.00 mg/L抗生素Cef能促進愈傷組織分化成苗,添加200.00 mg/L抗生素Cef能促進幼苗生根.MS培養基中添加低量NAA更有利于甘蔗愈傷組織的分化;在促進細胞分裂時KT的效果明顯優于6-BA.MS培養基中添加5.00 mg/L NAA和70.00 g/L蔗糖能有效促進分化苗生根.利用建立的遺傳轉化體繫可穫得286株轉冷調節基因Cbcor1 5a的甘蔗轉化植株;選取83株通過PPT抗性篩選後長勢良好的轉化植株進行暘性檢測,其中有4株呈暘性.[結論]利用農桿菌介導的Cbcor15a基因轉化甘蔗的遺傳轉化體繫能成功將Cbcor15基因整閤到甘蔗基因組.
[목적]이용농간균개도법,장외원랭조절기인Cbcor15a도입감자유상조직,건립쾌속、고효적감자유전전화체계,위배육구항한성감자품충전정기출.[방법]이신태당22호(ROC22)위재료,통과대유상조직유도、분화、생근등배양기진행우화,사선출외원기인전화감자적괄합격소충류여용량、PPT용량、항생소충류여용량;이용감자전기인이원식물표체재체pCambia1300-Cbcor15a-bar,통과농간균개도법장목적기인Cbcor15a도입감자유상조직.[결과]당농간균균액OD600위0.4、침염20 min시유리우유상조직분화;감자유상조직유도화분화배양계단적최가PPT위0.50mg/L.침염후재공배양중첨가500.00 mg/L항생소Cef능유효억제농간균,첨가300.00 mg/L항생소Cef능촉진유상조직분화성묘,첨가200.00 mg/L항생소Cef능촉진유묘생근.MS배양기중첨가저량NAA경유리우감자유상조직적분화;재촉진세포분렬시KT적효과명현우우6-BA.MS배양기중첨가5.00 mg/L NAA화70.00 g/L자당능유효촉진분화묘생근.이용건립적유전전화체계가획득286주전랭조절기인Cbcor1 5a적감자전화식주;선취83주통과PPT항성사선후장세량호적전화식주진행양성검측,기중유4주정양성.[결론]이용농간균개도적Cbcor15a기인전화감자적유전전화체계능성공장Cbcor15기인정합도감자기인조.
