热带作物学报
熱帶作物學報
열대작물학보
CHINESE JOURNAL OF TROPICAL CROPS
2014年
9期
1757-1763
,共7页
黄丹丹%车建美%刘波%陈庆河
黃丹丹%車建美%劉波%陳慶河
황단단%차건미%류파%진경하
短短芽胞杆菌%几丁质酶基因%克隆%表达%IPTG诱导
短短芽胞桿菌%幾丁質酶基因%剋隆%錶達%IPTG誘導
단단아포간균%궤정질매기인%극륭%표체%IPTG유도
Brevibacillus brevis%Chitinase gene%Clone%Express%IPTG induction
以短短芽胞杆菌FJAT-0809-GLX基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到几丁质酶基因chiD序列,再将chiD序列连接到pMD18-T克隆载体上,形成重组载体pMD 18-T-chiD,转化大肠杆菌DH5α并测序,经过核苷酸和氨基酸序列分析获得几丁质酶基因chiD的序列片段为1 524 bp,编码507个氨基酸,理论蛋白质分子量约54.55 ku,其等电点约为5.77,表明该几丁质酶为酸性几丁质酶.将重组质粒pMD 18-T-chiD双酶切后与表达载体pET-28a连接,构建重组表达载体pET28a-c hiD,并转入大肠杆菌BL21中进行IPTG诱导表达,结果表明:重组蛋白质的分子量约55 ku,与预测的蛋白分子量结果一致.为了提高重组蛋白的表达量,对培养时间、IPTG浓度和温度3个参数进行优化,并将表达产物进行SDS-PAGE分析,最后得出重组载体pET28a-chiD的最佳诱导表达参数分别为8h、0.5 mmol/L和28℃.这为短短芽胞杆菌来源的几丁质酶的进一步研究奠定了良好基础.
以短短芽胞桿菌FJAT-0809-GLX基因組DNA為模闆,通過PCR擴增得到幾丁質酶基因chiD序列,再將chiD序列連接到pMD18-T剋隆載體上,形成重組載體pMD 18-T-chiD,轉化大腸桿菌DH5α併測序,經過覈苷痠和氨基痠序列分析穫得幾丁質酶基因chiD的序列片段為1 524 bp,編碼507箇氨基痠,理論蛋白質分子量約54.55 ku,其等電點約為5.77,錶明該幾丁質酶為痠性幾丁質酶.將重組質粒pMD 18-T-chiD雙酶切後與錶達載體pET-28a連接,構建重組錶達載體pET28a-c hiD,併轉入大腸桿菌BL21中進行IPTG誘導錶達,結果錶明:重組蛋白質的分子量約55 ku,與預測的蛋白分子量結果一緻.為瞭提高重組蛋白的錶達量,對培養時間、IPTG濃度和溫度3箇參數進行優化,併將錶達產物進行SDS-PAGE分析,最後得齣重組載體pET28a-chiD的最佳誘導錶達參數分彆為8h、0.5 mmol/L和28℃.這為短短芽胞桿菌來源的幾丁質酶的進一步研究奠定瞭良好基礎.
이단단아포간균FJAT-0809-GLX기인조DNA위모판,통과PCR확증득도궤정질매기인chiD서렬,재장chiD서렬련접도pMD18-T극륭재체상,형성중조재체pMD 18-T-chiD,전화대장간균DH5α병측서,경과핵감산화안기산서렬분석획득궤정질매기인chiD적서렬편단위1 524 bp,편마507개안기산,이론단백질분자량약54.55 ku,기등전점약위5.77,표명해궤정질매위산성궤정질매.장중조질립pMD 18-T-chiD쌍매절후여표체재체pET-28a련접,구건중조표체재체pET28a-c hiD,병전입대장간균BL21중진행IPTG유도표체,결과표명:중조단백질적분자량약55 ku,여예측적단백분자량결과일치.위료제고중조단백적표체량,대배양시간、IPTG농도화온도3개삼수진행우화,병장표체산물진행SDS-PAGE분석,최후득출중조재체pET28a-chiD적최가유도표체삼수분별위8h、0.5 mmol/L화28℃.저위단단아포간균래원적궤정질매적진일보연구전정료량호기출.
