山地农业生物学报
山地農業生物學報
산지농업생물학보
JOURNAL OF MOUNTAIN AGRICULTURE AND BIOLOGY
2014年
4期
27-35
,共9页
杜仲%糖基转移酶%RACE技术
杜仲%糖基轉移酶%RACE技術
두중%당기전이매%RACE기술
Eucommia ulmoides Olive%Glucosyltransferase%SMART-RACE
本研究以杜仲(Eucommia ulmoides)7月雌株新生幼枝的树皮为材料,根据杜仲转录组测序数据中筛选的一个糖基转移酶基因(CGT)片段信息设计引物,采用SMART RACE技术,克隆了5’-端1432bp和3’-端535 bp cDNA片段,测序拼接后获得全长1583 bp的杜仲CGT的cDNA序列。分析结果表明,该cDNA开放阅读框长1464 bp,编码487个氨基酸,命名为EuGT基因。 EuGT在NCBI中经blastn比对,显示序列与甜橙和草莓的UDP-葡萄糖基转移酶基因同源性分别为72%和67%；推测的氨基酸序列经blastp和CDD比对,显示序列与UDP-葡萄糖类黄酮3-O-糖基转移酶-6同源,其中含有UDP-葡萄糖基转移酶的保守域( pfam00201),初步推测EuCGT1蛋白属于糖基转移酶家族。本研究克隆的EuGT基因是首次从杜仲中克隆的糖基转移酶家族基因。以EuCGT1基因构建的植物表达载体pSH-35S-EuCGT1采用农杆菌介导法遗传转化烟草,获得了含EuCGT1基因的转基因烟株,移栽生长1个月的转基因烟草植株在表型上与野生型烟草无明显差异。
本研究以杜仲(Eucommia ulmoides)7月雌株新生幼枝的樹皮為材料,根據杜仲轉錄組測序數據中篩選的一箇糖基轉移酶基因(CGT)片段信息設計引物,採用SMART RACE技術,剋隆瞭5’-耑1432bp和3’-耑535 bp cDNA片段,測序拼接後穫得全長1583 bp的杜仲CGT的cDNA序列。分析結果錶明,該cDNA開放閱讀框長1464 bp,編碼487箇氨基痠,命名為EuGT基因。 EuGT在NCBI中經blastn比對,顯示序列與甜橙和草莓的UDP-葡萄糖基轉移酶基因同源性分彆為72%和67%；推測的氨基痠序列經blastp和CDD比對,顯示序列與UDP-葡萄糖類黃酮3-O-糖基轉移酶-6同源,其中含有UDP-葡萄糖基轉移酶的保守域( pfam00201),初步推測EuCGT1蛋白屬于糖基轉移酶傢族。本研究剋隆的EuGT基因是首次從杜仲中剋隆的糖基轉移酶傢族基因。以EuCGT1基因構建的植物錶達載體pSH-35S-EuCGT1採用農桿菌介導法遺傳轉化煙草,穫得瞭含EuCGT1基因的轉基因煙株,移栽生長1箇月的轉基因煙草植株在錶型上與野生型煙草無明顯差異。
본연구이두중(Eucommia ulmoides)7월자주신생유지적수피위재료,근거두중전록조측서수거중사선적일개당기전이매기인(CGT)편단신식설계인물,채용SMART RACE기술,극륭료5’-단1432bp화3’-단535 bp cDNA편단,측서병접후획득전장1583 bp적두중CGT적cDNA서렬。분석결과표명,해cDNA개방열독광장1464 bp,편마487개안기산,명명위EuGT기인。 EuGT재NCBI중경blastn비대,현시서렬여첨등화초매적UDP-포도당기전이매기인동원성분별위72%화67%；추측적안기산서렬경blastp화CDD비대,현시서렬여UDP-포도당류황동3-O-당기전이매-6동원,기중함유UDP-포도당기전이매적보수역( pfam00201),초보추측EuCGT1단백속우당기전이매가족。본연구극륭적EuGT기인시수차종두중중극륭적당기전이매가족기인。이EuCGT1기인구건적식물표체재체pSH-35S-EuCGT1채용농간균개도법유전전화연초,획득료함EuCGT1기인적전기인연주,이재생장1개월적전기인연초식주재표형상여야생형연초무명현차이。
The cDNA sequence of glucosyltransferase gene (EuCGT1) was cloned from the total RNA of Eucommia ulmoides bark using the method of SMART-RACE. The results revealed that the EuCGT1 was 1 583 bp in length, containing an open reading frame ( ORF) of 1 464 bp encoding a protein of 487 amino acids. EuCGT1 sequence shared 72% and 67% DNA homology with the UDP-GT gene sequence of Citrus sinensis and Fragaria x ananas-sa, respectively. The conserved domains database ( CDD) search suggested the EuCGT1 had similar domain to pfam00201, as the UDP- Glucosyltransferase proteins. Dicot expressionas vector pSH-35S-EuCGT1 was con-structed and transformed into Nicotiana tabacum L. via mediated with Agrobacterium tumefaciens. Seven transgenic tobacco lines were obtained after GUS histochemical staining and PCR molecular detection. The transgenic tobacco demonstrated similar phenotypes as the wild types after one month growth.
