中山大学学报（医学科学版）
中山大學學報（醫學科學版）
중산대학학보（의학과학판）
JOURNAL OF SUN YAT-SEN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2014年
5期
695-701
,共7页
田蓉%刘秋慧%蔡萌%李静%王菁%肖伟%罗燕
田蓉%劉鞦慧%蔡萌%李靜%王菁%肖偉%囉燕
전용%류추혜%채맹%리정%왕정%초위%라연
人视网膜血管内皮细胞%Claudin-5%紧密连接%屏障功能%慢病毒转染
人視網膜血管內皮細胞%Claudin-5%緊密連接%屏障功能%慢病毒轉染
인시망막혈관내피세포%Claudin-5%긴밀련접%병장공능%만병독전염
human retinal vascular endothelial cell%Claudin-5%tight junction%barrier function,lentivirus-mediated transfection
[目的]探讨过表达Claudin-5后对视网膜血管内皮细胞屏障功能的影响.[方法]体外原代培养人视网膜血管内皮细胞(hRVEC).当接种至transwell膜的P2～P5代hRVEC近60％融合时进行慢病毒介导的转染实验.hRVEC分为对照组,慢病毒空载体组,慢病毒介导的Claudin-5高表达转染组.荧光活细胞动态显微镜观察慢病毒介导的转染效率.Western Blot检测各组细胞中Claudin-5表达水平.CCK8法检测病毒转染对细胞的毒性.待接种至transwell膜的hRVEC培养2周后建立稳定的单层人视网膜血管内皮细胞屏障模型后,电阻仪检测hRVEC屏障的跨内皮电阻(TER),异硫氰酸荧光素右旋糖酐检测hRVEC屏障的通透性.[结果]慢病毒可以介导Claudin-5在hRVEC高表达,其转染率达60％,Western Blot检测证实Claudin-5蛋白表达显著增加.CCK8检测表明慢病毒转染不影响细胞的活性,对细胞毒性小;过表达Claudin-5后也不影响hRVEC的增殖;过表达Claudin-5后能降低体外单层人视网膜血管内皮细胞屏障模型的通透性,并提高其TER.[结论]过表达Claudin-5后可以显著提高体外人视网膜血管内皮细胞屏障的功能,这为视网膜血管性疾病的治疗提供新思路.
[目的]探討過錶達Claudin-5後對視網膜血管內皮細胞屏障功能的影響.[方法]體外原代培養人視網膜血管內皮細胞(hRVEC).噹接種至transwell膜的P2～P5代hRVEC近60％融閤時進行慢病毒介導的轉染實驗.hRVEC分為對照組,慢病毒空載體組,慢病毒介導的Claudin-5高錶達轉染組.熒光活細胞動態顯微鏡觀察慢病毒介導的轉染效率.Western Blot檢測各組細胞中Claudin-5錶達水平.CCK8法檢測病毒轉染對細胞的毒性.待接種至transwell膜的hRVEC培養2週後建立穩定的單層人視網膜血管內皮細胞屏障模型後,電阻儀檢測hRVEC屏障的跨內皮電阻(TER),異硫氰痠熒光素右鏇糖酐檢測hRVEC屏障的通透性.[結果]慢病毒可以介導Claudin-5在hRVEC高錶達,其轉染率達60％,Western Blot檢測證實Claudin-5蛋白錶達顯著增加.CCK8檢測錶明慢病毒轉染不影響細胞的活性,對細胞毒性小;過錶達Claudin-5後也不影響hRVEC的增殖;過錶達Claudin-5後能降低體外單層人視網膜血管內皮細胞屏障模型的通透性,併提高其TER.[結論]過錶達Claudin-5後可以顯著提高體外人視網膜血管內皮細胞屏障的功能,這為視網膜血管性疾病的治療提供新思路.
[목적]탐토과표체Claudin-5후대시망막혈관내피세포병장공능적영향.[방법]체외원대배양인시망막혈관내피세포(hRVEC).당접충지transwell막적P2～P5대hRVEC근60％융합시진행만병독개도적전염실험.hRVEC분위대조조,만병독공재체조,만병독개도적Claudin-5고표체전염조.형광활세포동태현미경관찰만병독개도적전염효솔.Western Blot검측각조세포중Claudin-5표체수평.CCK8법검측병독전염대세포적독성.대접충지transwell막적hRVEC배양2주후건립은정적단층인시망막혈관내피세포병장모형후,전조의검측hRVEC병장적과내피전조(TER),이류청산형광소우선당항검측hRVEC병장적통투성.[결과]만병독가이개도Claudin-5재hRVEC고표체,기전염솔체60％,Western Blot검측증실Claudin-5단백표체현저증가.CCK8검측표명만병독전염불영향세포적활성,대세포독성소;과표체Claudin-5후야불영향hRVEC적증식;과표체Claudin-5후능강저체외단층인시망막혈관내피세포병장모형적통투성,병제고기TER.[결론]과표체Claudin-5후가이현저제고체외인시망막혈관내피세포병장적공능,저위시망막혈관성질병적치료제공신사로.
