CAJ | 학술논문

为建立特异性和敏感性较高的鸭坦布苏病毒(DTMUV)抗体检测方法,采用原核表达系统对DTMUV E蛋白的DⅢ结构域进行了双串联融合表达,SDS-PAGE电泳结果显示目的蛋白大小约25 Ku.Western blot结果显示,经亲和层析纯化的重组蛋白能与DTMUV阳性血清发生特异性反应.以纯化的重组DⅢ蛋白作为包被抗原,初步建立了检测DTMUV血清抗体的间接ELISA方法.采用梯度稀释法对ELISA各种反应条件进行优化,确定最适工作条件.重组抗原最适包被浓度为5 μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶100,兔抗鸭酶标抗体最适稀释度为1∶1000;抗体临界值S/P≥0.336判定为阳性,S/P≤0.287判定为阴性,介于两者之间为可疑.该方法检测禽流感病毒、鸭源新城疫、鸭甲肝病毒、鸭圆环病毒、鸭细小病毒、经典呼肠孤病毒及新型鸭呼肠孤病毒等血清均为阴性,4个批次批内与批间重复试验的OD值变异系数分别为6.21％～7.27％和3.4％～7.2％,显示该法具有很好的特异性、稳定性和重复性.用建立的间接ELISA与中和试验分别对108份疑似鸭坦布苏病血清样品进行检测,两种方法的阳性符合率为83.3％.
위건립특이성화민감성교고적압탄포소병독(DTMUV)항체검측방법,채용원핵표체계통대DTMUV E단백적DⅢ결구역진행료쌍천련융합표체,SDS-PAGE전영결과현시목적단백대소약25 Ku.Western blot결과현시,경친화층석순화적중조단백능여DTMUV양성혈청발생특이성반응.이순화적중조DⅢ단백작위포피항원,초보건립료검측DTMUV혈청항체적간접ELISA방법.채용제도희석법대ELISA각충반응조건진행우화,학정최괄공작조건.중조항원최괄포피농도위5 μg/mL,혈청적최가희석도위1∶100,토항압매표항체최괄희석도위1∶1000;항체림계치S/P≥0.336판정위양성,S/P≤0.287판정위음성,개우량자지간위가의.해방법검측금류감병독、압원신성역、압갑간병독、압원배병독、압세소병독、경전호장고병독급신형압호장고병독등혈청균위음성,4개비차비내여비간중복시험적OD치변이계수분별위6.21％～7.27％화3.4％～7.2％,현시해법구유흔호적특이성、은정성화중복성.용건립적간접ELISA여중화시험분별대108빈의사압탄포소병혈청양품진행검측,량충방법적양성부합솔위83.3％.