CAJ | 학술논문

DNA编辑技术是基因靶向修饰技术的研究热点,已广泛应用于生物医学和农业研究.然而,传统基因打靶技术存在效率低、成本高、工作量大等缺点,其应用受到了极大的限制.文章利用最近发展起来的新型人工核酸酶——转录激活因子样效应物核酸酶(Transcription activator-like effector nuclease,TALENs)介导的基因组定点修饰技术,通过构建特异识别猪生长激素受体(GHR)基因的TALENs表达载体,共转染巴马胎猪成纤维细胞系,酶切鉴定G418抗性克隆细胞株的基因修饰效率为46.2％,其中2个为双等位基因敲除的克隆细胞株.以双等位基因敲除的克隆细胞株为核供体,利用手工克隆技术制备GHR-KO巴马猪克隆胚,第6d囊胚率为43.5％,654枚体外发育的囊胚移植6头受体母猪,共获得10头存活的GHR-KO巴马仔猪,其中7头为双等位基因敲除.体重检测结果显示,第20周龄的GHR-KO巴马猪体重仅为对照巴马猪的50％.研究结果表明,TALENs和手工克隆技术能够高效制备出基因敲除大动物.GHR-KO巴马猪的成功制备为研究猪GHR基因生理功能以及人类侏儒症分子机理提供了重要模型,也证明该技术比传统基因打靶和克隆技术具备更简捷、快速、高效,更易于在生物医学和农业基因靶向修饰研究中推广.
DNA편집기술시기인파향수식기술적연구열점,이엄범응용우생물의학화농업연구.연이,전통기인타파기술존재효솔저、성본고、공작량대등결점,기응용수도료겁대적한제.문장이용최근발전기래적신형인공핵산매——전록격활인자양효응물핵산매(Transcription activator-like effector nuclease,TALENs)개도적기인조정점수식기술,통과구건특이식별저생장격소수체(GHR)기인적TALENs표체재체,공전염파마태저성섬유세포계,매절감정G418항성극륭세포주적기인수식효솔위46.2％,기중2개위쌍등위기인고제적극륭세포주.이쌍등위기인고제적극륭세포주위핵공체,이용수공극륭기술제비GHR-KO파마저극륭배,제6d낭배솔위43.5％,654매체외발육적낭배이식6두수체모저,공획득10두존활적GHR-KO파마자저,기중7두위쌍등위기인고제.체중검측결과현시,제20주령적GHR-KO파마저체중부위대조파마저적50％.연구결과표명,TALENs화수공극륭기술능구고효제비출기인고제대동물.GHR-KO파마저적성공제비위연구저GHR기인생리공능이급인류주유증분자궤리제공료중요모형,야증명해기술비전통기인타파화극륭기술구비경간첩、쾌속、고효,경역우재생물의학화농업기인파향수식연구중추엄.