南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2014年
9期
1359-1364
,共6页
廉滋珍%曹佐武%陈冉%陈雷%薛樱子%秦俊文%齐绪峰%张春雪%禹艳红
廉滋珍%曹佐武%陳冉%陳雷%薛櫻子%秦俊文%齊緒峰%張春雪%禹豔紅
렴자진%조좌무%진염%진뢰%설앵자%진준문%제서봉%장춘설%우염홍
RNA干扰%附睾特异表达蛋白%meClps%慢病毒%精子运动
RNA榦擾%附睪特異錶達蛋白%meClps%慢病毒%精子運動
RNA간우%부고특이표체단백%meClps%만병독%정자운동
RNA interference%epididymis-specific protein%mouse epididymis-specific colipase-like gene%lentivirus%sperm mobility
目的 筛选能有效干扰小鼠附睾特异的类辅脂酶meClps基因表达的RNA靶点,并通过慢病毒介导的RNAi敲低meClps 表达后分析对精子运动的影响.方法 构建真核表达载体pDsRed2.0-C1-meClps中并转染NIH-3T3细胞,用meClps抗血清检测meClps蛋白的表达.针对meClps基因的序列设计并合成3对靶向干扰meClps表达的寡核苷酸序列,构建重组慢病毒载体pRNAT-U6.2/lenti-RNAi-251、224和286.将重组慢病毒干扰质粒分别与pDsRed2.0-C 1-meClps共转染到NIH-3T3细胞,半定量PCR和Western blotting检测meClps基因在mRNA和蛋白水平的变化.将筛选得到的干扰效果最好的慢病毒载体包装慢病毒,注射到小鼠附睾头部组织后分析对附睾尾部精子运动性能的影响.结果 构建了体外表达meClps蛋白的pDsRed2.0-C 1-meClps表达载体和靶向meClps基因的慢病毒RNAi载体.靶向meClps的RNA干扰载体对转染pDsRed2.0-C1-meClps后的NIH-3T3细胞中的meClps的mRNA和蛋白表达都有抑制,但以转染pRNAT-U6.2/lenti-RNAi-251对meClps的抑制效果最明显.包装后的慢病毒注射到小鼠附睾头部后附睾尾部组织中的精子运动速率降低(P＜0.05).结论 筛选出RNAi-251能有效干扰meClps表达,通过慢病毒介导的RNAi敲低meClps表达后精子运动性能降低.
目的 篩選能有效榦擾小鼠附睪特異的類輔脂酶meClps基因錶達的RNA靶點,併通過慢病毒介導的RNAi敲低meClps 錶達後分析對精子運動的影響.方法 構建真覈錶達載體pDsRed2.0-C1-meClps中併轉染NIH-3T3細胞,用meClps抗血清檢測meClps蛋白的錶達.針對meClps基因的序列設計併閤成3對靶嚮榦擾meClps錶達的寡覈苷痠序列,構建重組慢病毒載體pRNAT-U6.2/lenti-RNAi-251、224和286.將重組慢病毒榦擾質粒分彆與pDsRed2.0-C 1-meClps共轉染到NIH-3T3細胞,半定量PCR和Western blotting檢測meClps基因在mRNA和蛋白水平的變化.將篩選得到的榦擾效果最好的慢病毒載體包裝慢病毒,註射到小鼠附睪頭部組織後分析對附睪尾部精子運動性能的影響.結果 構建瞭體外錶達meClps蛋白的pDsRed2.0-C 1-meClps錶達載體和靶嚮meClps基因的慢病毒RNAi載體.靶嚮meClps的RNA榦擾載體對轉染pDsRed2.0-C1-meClps後的NIH-3T3細胞中的meClps的mRNA和蛋白錶達都有抑製,但以轉染pRNAT-U6.2/lenti-RNAi-251對meClps的抑製效果最明顯.包裝後的慢病毒註射到小鼠附睪頭部後附睪尾部組織中的精子運動速率降低(P＜0.05).結論 篩選齣RNAi-251能有效榦擾meClps錶達,通過慢病毒介導的RNAi敲低meClps錶達後精子運動性能降低.
목적 사선능유효간우소서부고특이적류보지매meClps기인표체적RNA파점,병통과만병독개도적RNAi고저meClps 표체후분석대정자운동적영향.방법 구건진핵표체재체pDsRed2.0-C1-meClps중병전염NIH-3T3세포,용meClps항혈청검측meClps단백적표체.침대meClps기인적서렬설계병합성3대파향간우meClps표체적과핵감산서렬,구건중조만병독재체pRNAT-U6.2/lenti-RNAi-251、224화286.장중조만병독간우질립분별여pDsRed2.0-C 1-meClps공전염도NIH-3T3세포,반정량PCR화Western blotting검측meClps기인재mRNA화단백수평적변화.장사선득도적간우효과최호적만병독재체포장만병독,주사도소서부고두부조직후분석대부고미부정자운동성능적영향.결과 구건료체외표체meClps단백적pDsRed2.0-C 1-meClps표체재체화파향meClps기인적만병독RNAi재체.파향meClps적RNA간우재체대전염pDsRed2.0-C1-meClps후적NIH-3T3세포중적meClps적mRNA화단백표체도유억제,단이전염pRNAT-U6.2/lenti-RNAi-251대meClps적억제효과최명현.포장후적만병독주사도소서부고두부후부고미부조직중적정자운동속솔강저(P＜0.05).결론 사선출RNAi-251능유효간우meClps표체,통과만병독개도적RNAi고저meClps표체후정자운동성능강저.
