中华乳腺病杂志（电子版）
中華乳腺病雜誌（電子版）
중화유선병잡지（전자판）
CHINESE JOURNAL OF BREAST DISEASE(ELECTRONIC VERSION)
2014年
4期
27-33
,共7页
杜洪泉%黄丽莉%贾爱华%蒋群龙%张光珍%白洁
杜洪泉%黃麗莉%賈愛華%蔣群龍%張光珍%白潔
두홍천%황려리%가애화%장군룡%장광진%백길
二甲双胍%乳腺肿瘤%4 T1细胞%细胞周期蛋白D1
二甲雙胍%乳腺腫瘤%4 T1細胞%細胞週期蛋白D1
이갑쌍고%유선종류%4 T1세포%세포주기단백D1
Metformin%Breast neoplasms%4T1 cells%Cyclin D1
目的：研究二甲双胍及单磷酸腺苷活化蛋白激酶（ AMPK）抑制剂（ compound C ）对体外培养的小鼠乳腺癌4T1细胞株增殖抑制及细胞周期蛋白D1（cyclin D1）表达的影响，进一步探索AMPK通路在二甲双胍抗肿瘤的可能作用。方法体外培养小鼠乳腺癌4 T1细胞株至对数生长期，分别以2.5、5、10、20、40 mmol/L二甲双胍及20μmol/L compound C 对其进行单一或10 mmol/L二甲双胍联合20μmol/L compound C干预24、48、72 h。应用CCK-8方法检测不同浓度的二甲双胍、20μmol/L compound C、20μmol/L compound C＋10 mmol/L二甲双胍对该细胞株增殖的抑制情况；Western blot法检测各组细胞内cyclin D1的表达情况。多组比较采用单因素方差分析，两两比较采用q检验，治疗前后用重复测量数据资料的方差分析。结果 CCK-8法结果显示在体外细胞培养实验中2.5 mmol/L二甲双胍组作用于该细胞株24、48 h后分别和正常对照组比较，细胞存活率差异无统计学意义（24 h： F＝2.87， P＝0.129；48 h：F＝1.63， P＝0.290），作用72 h后，差异有统计学意义（ F＝6.40， P＝0.000）。5、10、20、40 mmol/L二甲双胍组作用于该细胞株24、48、72 h后，该细胞株的增殖被显著抑制（均P＝0.000），且抑制程度随着药物浓度的增大（ F＝332.89、363.54、352.11， P均＝0.000）及作用时间的延长而逐渐增强， compound C单独处理组及10 mmol/L二甲双胍联合20μmol/L compound C处理细胞24、48、72 h后，细胞存活率与正常对照组相比较，差异无统计学意义（ F＝1.08，P＝2.283； F＝1.92， P＝0.050）。 Western blot结果显示随着二甲双胍浓度的增加，各组细胞 cyclin D1表达水平逐渐降低（ F＝54.41、61.69、75.84， P均＝0.000），10 mmol/L二甲双胍联合20μmol/L compound C 作用时，与正常对照组比较， cyclin D1表达水平无明显变化（F＝1.87， P＝0.190）。结论二甲双胍可以抑制小鼠乳腺癌4T1细胞的增殖；compound C可以拮抗二甲双胍的抑制作用；二甲双胍通过激活小鼠乳腺癌4T1细胞内AMPK，下调cyclin D1蛋白表达。
目的：研究二甲雙胍及單燐痠腺苷活化蛋白激酶（ AMPK）抑製劑（ compound C ）對體外培養的小鼠乳腺癌4T1細胞株增殖抑製及細胞週期蛋白D1（cyclin D1）錶達的影響，進一步探索AMPK通路在二甲雙胍抗腫瘤的可能作用。方法體外培養小鼠乳腺癌4 T1細胞株至對數生長期，分彆以2.5、5、10、20、40 mmol/L二甲雙胍及20μmol/L compound C 對其進行單一或10 mmol/L二甲雙胍聯閤20μmol/L compound C榦預24、48、72 h。應用CCK-8方法檢測不同濃度的二甲雙胍、20μmol/L compound C、20μmol/L compound C＋10 mmol/L二甲雙胍對該細胞株增殖的抑製情況；Western blot法檢測各組細胞內cyclin D1的錶達情況。多組比較採用單因素方差分析，兩兩比較採用q檢驗，治療前後用重複測量數據資料的方差分析。結果 CCK-8法結果顯示在體外細胞培養實驗中2.5 mmol/L二甲雙胍組作用于該細胞株24、48 h後分彆和正常對照組比較，細胞存活率差異無統計學意義（24 h： F＝2.87， P＝0.129；48 h：F＝1.63， P＝0.290），作用72 h後，差異有統計學意義（ F＝6.40， P＝0.000）。5、10、20、40 mmol/L二甲雙胍組作用于該細胞株24、48、72 h後，該細胞株的增殖被顯著抑製（均P＝0.000），且抑製程度隨著藥物濃度的增大（ F＝332.89、363.54、352.11， P均＝0.000）及作用時間的延長而逐漸增彊， compound C單獨處理組及10 mmol/L二甲雙胍聯閤20μmol/L compound C處理細胞24、48、72 h後，細胞存活率與正常對照組相比較，差異無統計學意義（ F＝1.08，P＝2.283； F＝1.92， P＝0.050）。 Western blot結果顯示隨著二甲雙胍濃度的增加，各組細胞 cyclin D1錶達水平逐漸降低（ F＝54.41、61.69、75.84， P均＝0.000），10 mmol/L二甲雙胍聯閤20μmol/L compound C 作用時，與正常對照組比較， cyclin D1錶達水平無明顯變化（F＝1.87， P＝0.190）。結論二甲雙胍可以抑製小鼠乳腺癌4T1細胞的增殖；compound C可以拮抗二甲雙胍的抑製作用；二甲雙胍通過激活小鼠乳腺癌4T1細胞內AMPK，下調cyclin D1蛋白錶達。
목적：연구이갑쌍고급단린산선감활화단백격매（ AMPK）억제제（ compound C ）대체외배양적소서유선암4T1세포주증식억제급세포주기단백D1（cyclin D1）표체적영향，진일보탐색AMPK통로재이갑쌍고항종류적가능작용。방법체외배양소서유선암4 T1세포주지대수생장기，분별이2.5、5、10、20、40 mmol/L이갑쌍고급20μmol/L compound C 대기진행단일혹10 mmol/L이갑쌍고연합20μmol/L compound C간예24、48、72 h。응용CCK-8방법검측불동농도적이갑쌍고、20μmol/L compound C、20μmol/L compound C＋10 mmol/L이갑쌍고대해세포주증식적억제정황；Western blot법검측각조세포내cyclin D1적표체정황。다조비교채용단인소방차분석，량량비교채용q검험，치료전후용중복측량수거자료적방차분석。결과 CCK-8법결과현시재체외세포배양실험중2.5 mmol/L이갑쌍고조작용우해세포주24、48 h후분별화정상대조조비교，세포존활솔차이무통계학의의（24 h： F＝2.87， P＝0.129；48 h：F＝1.63， P＝0.290），작용72 h후，차이유통계학의의（ F＝6.40， P＝0.000）。5、10、20、40 mmol/L이갑쌍고조작용우해세포주24、48、72 h후，해세포주적증식피현저억제（균P＝0.000），차억제정도수착약물농도적증대（ F＝332.89、363.54、352.11， P균＝0.000）급작용시간적연장이축점증강， compound C단독처리조급10 mmol/L이갑쌍고연합20μmol/L compound C처리세포24、48、72 h후，세포존활솔여정상대조조상비교，차이무통계학의의（ F＝1.08，P＝2.283； F＝1.92， P＝0.050）。 Western blot결과현시수착이갑쌍고농도적증가，각조세포 cyclin D1표체수평축점강저（ F＝54.41、61.69、75.84， P균＝0.000），10 mmol/L이갑쌍고연합20μmol/L compound C 작용시，여정상대조조비교， cyclin D1표체수평무명현변화（F＝1.87， P＝0.190）。결론이갑쌍고가이억제소서유선암4T1세포적증식；compound C가이길항이갑쌍고적억제작용；이갑쌍고통과격활소서유선암4T1세포내AMPK，하조cyclin D1단백표체。
Objective To evaluate the effects of metformin alone or in combination with AMPK inhibitor compound C on proliferation and cyclin D 1 expression in mouse breast cancer 4T1 cells and explore the possible role of AMPK pathway in the antitumor mechanism of metformin .Methods The mouse breast cancer 4T1 cells were cultured in vitro until the logarithm growth period , and then treated with 2.5, 5, 10, 20, 40 mmol/L metformin and 20 μmol/L compound C respectively and 20 μmol/L compound C combined with 10 mmol/L metformin for 24, 48, 72 h.CCK-8 method was used to study the effects of metformin with different concentrations, 20μmol/L compound C+10 mmol/L metformin, 20 μmol/L compound C on cell proliferation . The expression of cyclinD 1 was detected with Western blot method .Multiple group comparison was performed by F test, pairwise comparison by q test, analysis of variance for repeated measurement data before and after treatment.Results CCK-8 test showed that in vitro cell culture , at 24, 48 h after 2.5 mmol/L metformin treatment, there was no significant difference in cell survival compared with control group (24 h:F=2.87,P=0.129;48 h:F=1.63 , P=0.290 ) , but a significant difference was observed at 72 h ( F=6.40 , P=0.000 ) . at 24, 48 and 72 h after 5, 10, 20, 40 mmol/L metformin treatment, the proliferation of mouse breast cancer 4T1 cells was significantly inhibited by metformin in a dose-dependent and time-dependent manner(F=332.89, 363.54 , 352.11 , all P=0.000 ) .Meanwhile in compound C group and 10 mmol/L metformin plus compound C group, cell survival showed no significant difference compared with the control group ( F=1.08 , P=2.283;F=1.92 ,P=0.050 ) .The results in Western blot analysis , the expression of cyclin D 1 decreased with the increase of metformin concentration ( F=54.41 , 61.69 , 75.84 , all P=0.000 ) , but showed no significant difference ( F=1.87 , P=0.190 ) between 10 mmol/L metformin plus compound C group and control group . Conclusions Metformin can inhibit the cell proliferation of mouse breast cancer 4T1 cells, but compound C can antagonize the inhibition of metformin .Metformin can decrease cyclin D 1 protein expression by activating AMPK pathway in mouse breast cancer 4T1 cells.
