农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2014年
10期
1298-1305
,共8页
微滴数字PCR(ddPCR)%转基因生物(GMOs)%外源基因%拷贝数
微滴數字PCR(ddPCR)%轉基因生物(GMOs)%外源基因%拷貝數
미적수자PCR(ddPCR)%전기인생물(GMOs)%외원기인%고패수
Droplet digital PCR(ddPCR)%Genetically modified organisms(GMOs)%Exogenous gene%Copy number
微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)是一种基于泊松分布原理的核酸分子绝对定量技术,在核酸分子的绝对计数/定量领域具有极大的应用潜力.本研究基于ddPCR平台,以转基因水稻(Oryza sativa)T1c-19和转人乳铁蛋白基因基因山羊(Capra hircus) 134为例,建立了转基因生物(genetically modified organisms,GMOs)外源基因拷贝数分析方法,并比较了其与传统的实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和Southern blot方法的准确性.实验数据表明,T1c-19的杀虫晶体蛋白基因(insecticidal crystal protein,Cry1C*)在qRT-PCR和ddPCR测定结果比较一致,约为2拷贝,但已报道的Southern blot分析结果为1拷贝;ddPCR对bar基因的分析结果高于qRT-PCR,分别为2.09拷贝和1.51拷贝.转人乳铁蛋白基因(human lactoferrin,HLF)山羊134在qRT-PCR和ddPCR的分析结果基本一致,均测得含有l拷贝的HLF基因.研究结果表明,微滴数字PCR方法是一种经济、快速和准确的外源基因拷贝数分析新方法,灵敏度和准确性高,将会在拷贝数分析中广泛应用.
微滴數字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)是一種基于泊鬆分佈原理的覈痠分子絕對定量技術,在覈痠分子的絕對計數/定量領域具有極大的應用潛力.本研究基于ddPCR平檯,以轉基因水稻(Oryza sativa)T1c-19和轉人乳鐵蛋白基因基因山羊(Capra hircus) 134為例,建立瞭轉基因生物(genetically modified organisms,GMOs)外源基因拷貝數分析方法,併比較瞭其與傳統的實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和Southern blot方法的準確性.實驗數據錶明,T1c-19的殺蟲晶體蛋白基因(insecticidal crystal protein,Cry1C*)在qRT-PCR和ddPCR測定結果比較一緻,約為2拷貝,但已報道的Southern blot分析結果為1拷貝;ddPCR對bar基因的分析結果高于qRT-PCR,分彆為2.09拷貝和1.51拷貝.轉人乳鐵蛋白基因(human lactoferrin,HLF)山羊134在qRT-PCR和ddPCR的分析結果基本一緻,均測得含有l拷貝的HLF基因.研究結果錶明,微滴數字PCR方法是一種經濟、快速和準確的外源基因拷貝數分析新方法,靈敏度和準確性高,將會在拷貝數分析中廣汎應用.
미적수자PCR(droplet digital PCR,ddPCR)시일충기우박송분포원리적핵산분자절대정량기술,재핵산분자적절대계수/정량영역구유겁대적응용잠력.본연구기우ddPCR평태,이전기인수도(Oryza sativa)T1c-19화전인유철단백기인기인산양(Capra hircus) 134위례,건립료전기인생물(genetically modified organisms,GMOs)외원기인고패수분석방법,병비교료기여전통적실시형광정량PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)화Southern blot방법적준학성.실험수거표명,T1c-19적살충정체단백기인(insecticidal crystal protein,Cry1C*)재qRT-PCR화ddPCR측정결과비교일치,약위2고패,단이보도적Southern blot분석결과위1고패;ddPCR대bar기인적분석결과고우qRT-PCR,분별위2.09고패화1.51고패.전인유철단백기인(human lactoferrin,HLF)산양134재qRT-PCR화ddPCR적분석결과기본일치,균측득함유l고패적HLF기인.연구결과표명,미적수자PCR방법시일충경제、쾌속화준학적외원기인고패수분석신방법,령민도화준학성고,장회재고패수분석중엄범응용.
