CAJ | 학술논문

肌肉生成抑制素(myostatin,MSTN)是肌肉发育的负调控基因,突变后会引起肌肉的过度发育,在肉用动物育种中有非常重要的价值.本研究利用锌指核酸酶(zinc finger nuclease,ZFN)对牛(Bos taurus)MSTN基因的第二外显子特异性剪切,诱导该基因的突变,从而达到敲除该基因的目的.首先对脂质体介导的双质粒共转染牛成纤维细胞的条件进行优化,获得的共转染效率高达19.27％;之后利用两组ZFNs对牛成纤维细胞进行转染,单细胞通过口吸法移入96孔板,经扩大培养后进行PCR筛选,获得18株MSTN基因突变细胞株,其中包括一株双等位基因敲除的细胞系,两组ZFNs对牛成纤维细胞的突变效率分别为6.05％和3.84％;最后,挑选一株突变细胞系进行体细胞核移植研究,共获得24枚重构胚;将去除透明带的重构胚培养于2i培养液中,获得囊胚来源的类滋养层干细胞,通过PCR和测序检测,证明该细胞系在MSTN基因第二外显子具有与供体细胞相同的突变.结果表明,所合成的两组ZFNs可以在MSTN作用位点引起突变,具有很高的突变效率,而且能获得双等位基因突变的细胞株,获得的细胞株能够用作体细胞核移植的供体细胞.本研究为肉用牛的品质改良和育种工作提供了基础资料.
기육생성억제소(myostatin,MSTN)시기육발육적부조공기인,돌변후회인기기육적과도발육,재육용동물육충중유비상중요적개치.본연구이용자지핵산매(zinc finger nuclease,ZFN)대우(Bos taurus)MSTN기인적제이외현자특이성전절,유도해기인적돌변,종이체도고제해기인적목적.수선대지질체개도적쌍질립공전염우성섬유세포적조건진행우화,획득적공전염효솔고체19.27％;지후이용량조ZFNs대우성섬유세포진행전염,단세포통과구흡법이입96공판,경확대배양후진행PCR사선,획득18주MSTN기인돌변세포주,기중포괄일주쌍등위기인고제적세포계,량조ZFNs대우성섬유세포적돌변효솔분별위6.05％화3.84％;최후,도선일주돌변세포계진행체세포핵이식연구,공획득24매중구배;장거제투명대적중구배배양우2i배양액중,획득낭배래원적류자양층간세포,통과PCR화측서검측,증명해세포계재MSTN기인제이외현자구유여공체세포상동적돌변.결과표명,소합성적량조ZFNs가이재MSTN작용위점인기돌변,구유흔고적돌변효솔,이차능획득쌍등위기인돌변적세포주,획득적세포주능구용작체세포핵이식적공체세포.본연구위육용우적품질개량화육충공작제공료기출자료.