CAJ | 학술논문

小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)作为胚胎干细胞培养的饲养层细胞,受到细胞代次等因素限制,需要长期反复制备,消耗大量的实验动物.寻找可替代小鼠胚胎成纤维细胞支持干细胞生长增殖的稳定细胞系,对于降低干细胞的培养成本和减少工作量具有重要意义.L-Wnt3a细胞是一个能够稳定向细胞外分泌Wnt3A蛋白的永生细胞系,目前尚不清楚其是否支持小鼠胚胎干细胞的培养.本研究探讨L-Wnt3a作为饲养层细胞对于小鼠(Mus musculus)胚胎干细胞系的建立以及该细胞条件培养液对无饲养层培养小鼠胚胎干细胞的影响.实验结果表明,丝裂霉素C浓度为10 μg/mL,作用4h时,可显著抑制L-Wnt3a细胞的体外生长而不影响细胞的活力.用该细胞制备饲养层,原代分离、培养小鼠胚胎干细胞,成功建立小鼠胚胎干细胞系.利用L-Wnt3a细胞制备条件培养液进行胚胎干细胞的培养,结果显示,L-Wnt3a条件培养液可支持小鼠胚胎干细胞在无饲养层条件下自我增殖,该条件下培养的胚胎干细胞表达碱性磷酸酶、Oct4、Sox2、Nanog、E-cadherin (E-CAD)和SSEA-1多能性因子,并能够在体内、外分化为3个胚层,形成嵌合体后代.L-Wnt3a细胞作为饲养层细胞,能够成功分离获得小鼠胚胎干细胞,可以避免小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层细胞存在的代数限制、制备繁琐等问题;并且L-Wnt3a条件培养液可以在无饲养层条件下维持小鼠胚胎干细胞的自我更新,能够在一定程度上有效避免饲养层细胞对胚胎干细胞造成的不利影响.
소서배태성섬유세포(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)작위배태간세포배양적사양층세포,수도세포대차등인소한제,수요장기반복제비,소모대량적실험동물.심조가체대소서배태성섬유세포지지간세포생장증식적은정세포계,대우강저간세포적배양성본화감소공작량구유중요의의.L-Wnt3a세포시일개능구은정향세포외분비Wnt3A단백적영생세포계,목전상불청초기시부지지소서배태간세포적배양.본연구탐토L-Wnt3a작위사양층세포대우소서(Mus musculus)배태간세포계적건립이급해세포조건배양액대무사양층배양소서배태간세포적영향.실험결과표명,사렬매소C농도위10 μg/mL,작용4h시,가현저억제L-Wnt3a세포적체외생장이불영향세포적활력.용해세포제비사양층,원대분리、배양소서배태간세포,성공건립소서배태간세포계.이용L-Wnt3a세포제비조건배양액진행배태간세포적배양,결과현시,L-Wnt3a조건배양액가지지소서배태간세포재무사양층조건하자아증식,해조건하배양적배태간세포표체감성린산매、Oct4、Sox2、Nanog、E-cadherin (E-CAD)화SSEA-1다능성인자,병능구재체내、외분화위3개배층,형성감합체후대.L-Wnt3a세포작위사양층세포,능구성공분리획득소서배태간세포,가이피면소서배태성섬유세포작위사양층세포존재적대수한제、제비번쇄등문제;병차L-Wnt3a조건배양액가이재무사양층조건하유지소서배태간세포적자아경신,능구재일정정도상유효피면사양층세포대배태간세포조성적불리영향.