上海交通大学学报（农业科学版）
上海交通大學學報（農業科學版）
상해교통대학학보（농업과학판）
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(AGRICULTURAL SCIENCE)
2014年
5期
76-83,94
,共9页
百子莲%胚性愈伤组织%玻璃化法超低温保存%遗传稳定性%AFLP
百子蓮%胚性愈傷組織%玻璃化法超低溫保存%遺傳穩定性%AFLP
백자련%배성유상조직%파리화법초저온보존%유전은정성%AFLP
Agapanthus praecox%embryogenic callus%vitrification-based cryopreservation%genetic stability%AFLP
采用单因素随机区组试验及多因素、多水平正交试验方案建立了百子莲胚性愈伤组织(embryogenic callus,ECs)玻璃化法超低温保存体系.将由花梗诱导的胚性愈伤组织接种至预培养基(MS+0.5 mol/L蔗糖+1％琼脂)上,在4℃下预培养2d后,在室温下加入装载液(MS+0.4mol/L蔗糖+2 mol/L丙三醇+10 mmol/L KNO3)处理60 min;利用改良后的PVS 2玻璃化溶液(MS+0.4 mol/L蔗糖+30％丙三醇+15％乙二醇+15％ DMSO)在0℃下处理40 min,将含有ECs的冻存管投入液氮中冻存1h;在40℃水浴中快速解冻90 s;用洗涤液(MS+1.2 mol/L蔗糖+ 10 mmol/L KNO3)处理30 min,每10 min换1次新鲜的洗涤液;洗涤后,接种到胚性愈伤组织增殖培养基上恢复培养24 h后,相对成活率分别达56.9％(TTC法)和43.3％(Evans blue法).恢复培养55 d的百子莲胚性愈伤组织经过AFLP多态性检测后未发现基因组变异,证明该方法可用于百子莲种质资源的超低温保存.
採用單因素隨機區組試驗及多因素、多水平正交試驗方案建立瞭百子蓮胚性愈傷組織(embryogenic callus,ECs)玻璃化法超低溫保存體繫.將由花梗誘導的胚性愈傷組織接種至預培養基(MS+0.5 mol/L蔗糖+1％瓊脂)上,在4℃下預培養2d後,在室溫下加入裝載液(MS+0.4mol/L蔗糖+2 mol/L丙三醇+10 mmol/L KNO3)處理60 min;利用改良後的PVS 2玻璃化溶液(MS+0.4 mol/L蔗糖+30％丙三醇+15％乙二醇+15％ DMSO)在0℃下處理40 min,將含有ECs的凍存管投入液氮中凍存1h;在40℃水浴中快速解凍90 s;用洗滌液(MS+1.2 mol/L蔗糖+ 10 mmol/L KNO3)處理30 min,每10 min換1次新鮮的洗滌液;洗滌後,接種到胚性愈傷組織增殖培養基上恢複培養24 h後,相對成活率分彆達56.9％(TTC法)和43.3％(Evans blue法).恢複培養55 d的百子蓮胚性愈傷組織經過AFLP多態性檢測後未髮現基因組變異,證明該方法可用于百子蓮種質資源的超低溫保存.
채용단인소수궤구조시험급다인소、다수평정교시험방안건립료백자련배성유상조직(embryogenic callus,ECs)파리화법초저온보존체계.장유화경유도적배성유상조직접충지예배양기(MS+0.5 mol/L자당+1％경지)상,재4℃하예배양2d후,재실온하가입장재액(MS+0.4mol/L자당+2 mol/L병삼순+10 mmol/L KNO3)처리60 min;이용개량후적PVS 2파리화용액(MS+0.4 mol/L자당+30％병삼순+15％을이순+15％ DMSO)재0℃하처리40 min,장함유ECs적동존관투입액담중동존1h;재40℃수욕중쾌속해동90 s;용세조액(MS+1.2 mol/L자당+ 10 mmol/L KNO3)처리30 min,매10 min환1차신선적세조액;세조후,접충도배성유상조직증식배양기상회복배양24 h후,상대성활솔분별체56.9％(TTC법)화43.3％(Evans blue법).회복배양55 d적백자련배성유상조직경과AFLP다태성검측후미발현기인조변이,증명해방법가용우백자련충질자원적초저온보존.
