首都医科大学学报
首都醫科大學學報
수도의과대학학보
JOURNAL OF CAPITAL UNIVERSITY OF MEDICAL SCIENCES
2014年
5期
608-616
,共9页
张云巍%徐丽娟%王淑芳%阎丽
張雲巍%徐麗娟%王淑芳%閻麗
장운외%서려연%왕숙방%염려
人脂肪间充质干细胞%分离%鉴定%诱导%肝脏样细胞
人脂肪間充質榦細胞%分離%鑒定%誘導%肝髒樣細胞
인지방간충질간세포%분리%감정%유도%간장양세포
human adipose tissue-derived mesenchymal stem cells (hADSCs)%isolation%identification%differentiation%hepatocyte-like cells
目的 探讨人脂肪间充质干细胞体外分离、培养、鉴定及向肝脏样细胞分化的方法.方法 采用胶原酶Ⅰ消化离心法获得人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived mesenchymal stem cells,hADSCs),原代培养并采用流式细胞仪检测干细胞相关表面抗原白细胞分化抗原13(Cluster differentiation13,CD13)、CD73、CD34、CD45和人类白细胞DR抗原(human leukocyte antigen DR,HLA-DR)的表达,采用诱导培养基将hADSCs向成脂及成骨方向诱导.采用两阶段细胞因子诱导法诱导hADSCs,并观察其形态变化;采用实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)法及细胞免疫组化法检测肝细胞相关基因甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)、细胞角蛋白18抗体(cytokeratin18,CK18)、细胞角蛋白19抗体(cytokeratin19,CK19)等在肝脏样细胞中的表达;采用糖元染色法(Periodic acid-Schiff stain,PAS)检测肝脏样细胞糖原合成情况.结果 用消化离心法获取的hADSCs大小均匀,呈梭形的成纤维细胞样,体外能长期培养存活,并保持不分化状态;流式细胞仪检测显示hADSCs高表达CD13、CD73,低表达CD34、CD45及HLA-DR;hADSCs体外可被诱导成脂肪细胞及成骨细胞.hADSCs经成肝诱导后,细胞形态由梭形变为多角形的肝脏样细胞,这些肝脏样细胞高表达血清白蛋白(serum albumin,ALB)、AFP、CY3P4等基因,并表达肝细胞相关性蛋白HepPa r-1、AFP、CK18、CK19.PAS染色显示肝脏样细胞胞质呈红色表现.结论 利用消化离心法在体外成功构建了人原代脂肪干细胞系,可长期存活,反复传代,经诱导后可转化为有功能的肝脏样细胞,为脂肪间充质干细胞作为生物人工肝及肝组织工程的种子细胞提供理论依据.
目的 探討人脂肪間充質榦細胞體外分離、培養、鑒定及嚮肝髒樣細胞分化的方法.方法 採用膠原酶Ⅰ消化離心法穫得人脂肪間充質榦細胞(human adipose-derived mesenchymal stem cells,hADSCs),原代培養併採用流式細胞儀檢測榦細胞相關錶麵抗原白細胞分化抗原13(Cluster differentiation13,CD13)、CD73、CD34、CD45和人類白細胞DR抗原(human leukocyte antigen DR,HLA-DR)的錶達,採用誘導培養基將hADSCs嚮成脂及成骨方嚮誘導.採用兩階段細胞因子誘導法誘導hADSCs,併觀察其形態變化;採用實時聚閤酶鏈式反應(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)法及細胞免疫組化法檢測肝細胞相關基因甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)、細胞角蛋白18抗體(cytokeratin18,CK18)、細胞角蛋白19抗體(cytokeratin19,CK19)等在肝髒樣細胞中的錶達;採用糖元染色法(Periodic acid-Schiff stain,PAS)檢測肝髒樣細胞糖原閤成情況.結果 用消化離心法穫取的hADSCs大小均勻,呈梭形的成纖維細胞樣,體外能長期培養存活,併保持不分化狀態;流式細胞儀檢測顯示hADSCs高錶達CD13、CD73,低錶達CD34、CD45及HLA-DR;hADSCs體外可被誘導成脂肪細胞及成骨細胞.hADSCs經成肝誘導後,細胞形態由梭形變為多角形的肝髒樣細胞,這些肝髒樣細胞高錶達血清白蛋白(serum albumin,ALB)、AFP、CY3P4等基因,併錶達肝細胞相關性蛋白HepPa r-1、AFP、CK18、CK19.PAS染色顯示肝髒樣細胞胞質呈紅色錶現.結論 利用消化離心法在體外成功構建瞭人原代脂肪榦細胞繫,可長期存活,反複傳代,經誘導後可轉化為有功能的肝髒樣細胞,為脂肪間充質榦細胞作為生物人工肝及肝組織工程的種子細胞提供理論依據.
목적 탐토인지방간충질간세포체외분리、배양、감정급향간장양세포분화적방법.방법 채용효원매Ⅰ소화리심법획득인지방간충질간세포(human adipose-derived mesenchymal stem cells,hADSCs),원대배양병채용류식세포의검측간세포상관표면항원백세포분화항원13(Cluster differentiation13,CD13)、CD73、CD34、CD45화인류백세포DR항원(human leukocyte antigen DR,HLA-DR)적표체,채용유도배양기장hADSCs향성지급성골방향유도.채용량계단세포인자유도법유도hADSCs,병관찰기형태변화;채용실시취합매련식반응(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)법급세포면역조화법검측간세포상관기인갑태단백(alpha fetoprotein,AFP)、세포각단백18항체(cytokeratin18,CK18)、세포각단백19항체(cytokeratin19,CK19)등재간장양세포중적표체;채용당원염색법(Periodic acid-Schiff stain,PAS)검측간장양세포당원합성정황.결과 용소화리심법획취적hADSCs대소균균,정사형적성섬유세포양,체외능장기배양존활,병보지불분화상태;류식세포의검측현시hADSCs고표체CD13、CD73,저표체CD34、CD45급HLA-DR;hADSCs체외가피유도성지방세포급성골세포.hADSCs경성간유도후,세포형태유사형변위다각형적간장양세포,저사간장양세포고표체혈청백단백(serum albumin,ALB)、AFP、CY3P4등기인,병표체간세포상관성단백HepPa r-1、AFP、CK18、CK19.PAS염색현시간장양세포포질정홍색표현.결론 이용소화리심법재체외성공구건료인원대지방간세포계,가장기존활,반복전대,경유도후가전화위유공능적간장양세포,위지방간충질간세포작위생물인공간급간조직공정적충자세포제공이론의거.
