首都医科大学学报
首都醫科大學學報
수도의과대학학보
JOURNAL OF CAPITAL UNIVERSITY OF MEDICAL SCIENCES
2014年
5期
551-554
,共4页
马晓彩%孙雪静%王胤颖%刘聪艳%万岁桂%苏力%孙婉玲
馬曉綵%孫雪靜%王胤穎%劉聰豔%萬歲桂%囌力%孫婉玲
마효채%손설정%왕윤영%류총염%만세계%소력%손완령
热变性%细胞亚群%交联剂%流式细胞术
熱變性%細胞亞群%交聯劑%流式細胞術
열변성%세포아군%교련제%류식세포술
heat denaturation%cell subset%crosslinker%flow cytometry
目的 探讨热变性对外周血细胞亚群标记效果的影响,从而建立稳定的流式-荧光原位杂交技术流程(flow cytometry-fluorescence in situ hybridization,Flow-FISH).方法 采集10例健康人肝素抗凝新鲜外周血标本,分别以Alexa Fluor(@) 647标记的CD3、CD19、CD14抗体标记T淋巴细胞、B淋巴细胞和单核细胞,高温变性后,采用流式细胞术分析热变性前后细胞系列特异性抗原表达的变化;以Fluor(@) 647-CD3标记外周血T淋巴细胞,以4种浓度的Bis[sulfosuccinimidyl] suberate(BS3)交联剂进行抗原抗体交联,比较不同浓度BS3的交联效果.结果 高温变性后,Alexa Fluor(@) 647标记的CD3和CD19的荧光强度减弱,但仍能有效区分出T淋巴细胞和B淋巴细胞;Alexa Fluor(@) 647-CD14的荧光强度无变化,单核细胞清晰可辨;4种浓度交联剂BS3作用后,CD3的标记效果基本一致.结论 经过热变性后,Alexa Fluor(@) 647标记的CD3、CD19、CD14抗体仍能够有效标记出血细胞中的不同细胞亚群,耐热性好,可以用于Flow-FISH技术中;交联剂BS3的适宜作用浓度为2.5 mmol/L.
目的 探討熱變性對外週血細胞亞群標記效果的影響,從而建立穩定的流式-熒光原位雜交技術流程(flow cytometry-fluorescence in situ hybridization,Flow-FISH).方法 採集10例健康人肝素抗凝新鮮外週血標本,分彆以Alexa Fluor(@) 647標記的CD3、CD19、CD14抗體標記T淋巴細胞、B淋巴細胞和單覈細胞,高溫變性後,採用流式細胞術分析熱變性前後細胞繫列特異性抗原錶達的變化;以Fluor(@) 647-CD3標記外週血T淋巴細胞,以4種濃度的Bis[sulfosuccinimidyl] suberate(BS3)交聯劑進行抗原抗體交聯,比較不同濃度BS3的交聯效果.結果 高溫變性後,Alexa Fluor(@) 647標記的CD3和CD19的熒光彊度減弱,但仍能有效區分齣T淋巴細胞和B淋巴細胞;Alexa Fluor(@) 647-CD14的熒光彊度無變化,單覈細胞清晰可辨;4種濃度交聯劑BS3作用後,CD3的標記效果基本一緻.結論 經過熱變性後,Alexa Fluor(@) 647標記的CD3、CD19、CD14抗體仍能夠有效標記齣血細胞中的不同細胞亞群,耐熱性好,可以用于Flow-FISH技術中;交聯劑BS3的適宜作用濃度為2.5 mmol/L.
목적 탐토열변성대외주혈세포아군표기효과적영향,종이건립은정적류식-형광원위잡교기술류정(flow cytometry-fluorescence in situ hybridization,Flow-FISH).방법 채집10례건강인간소항응신선외주혈표본,분별이Alexa Fluor(@) 647표기적CD3、CD19、CD14항체표기T림파세포、B림파세포화단핵세포,고온변성후,채용류식세포술분석열변성전후세포계렬특이성항원표체적변화;이Fluor(@) 647-CD3표기외주혈T림파세포,이4충농도적Bis[sulfosuccinimidyl] suberate(BS3)교련제진행항원항체교련,비교불동농도BS3적교련효과.결과 고온변성후,Alexa Fluor(@) 647표기적CD3화CD19적형광강도감약,단잉능유효구분출T림파세포화B림파세포;Alexa Fluor(@) 647-CD14적형광강도무변화,단핵세포청석가변;4충농도교련제BS3작용후,CD3적표기효과기본일치.결론 경과열변성후,Alexa Fluor(@) 647표기적CD3、CD19、CD14항체잉능구유효표기출혈세포중적불동세포아군,내열성호,가이용우Flow-FISH기술중;교련제BS3적괄의작용농도위2.5 mmol/L.
