南方农业学报
南方農業學報
남방농업학보
GUANGXI AGRICULTURAL SCIENCES
2014年
9期
1662-1668
,共7页
蒋小珍%彭金霞%韦嫔媛%陈晓汉
蔣小珍%彭金霞%韋嬪媛%陳曉漢
장소진%팽금하%위빈원%진효한
凡纳滨对虾%抑制性消减杂交技术(SSH)%文库%耐寒相关基因%斑点杂交
凡納濱對蝦%抑製性消減雜交技術(SSH)%文庫%耐寒相關基因%斑點雜交
범납빈대하%억제성소감잡교기술(SSH)%문고%내한상관기인%반점잡교
Litopenaeus vannamei%Suppression Subtractive Hybridization (SSH)%library%cold-related genes%dot blot hybridization
[目的]筛选出对虾耐寒相关基因,为今后进一步研究对虾耐寒分子机理提供科学依据.[方法]利用SSH技术构建低温处理与常温凡纳滨对虾的基因差异表达文库,并通过斑点杂交、克隆测序分析及候选基因RT-PCR扩增等对差减获得的耐寒相关功能基因进行验证.[结果]在构建的正、负文库768个克隆中有152个为低温高表达克隆、331个为常温高表达克隆;将正文库100个克隆拼接可获得ESTs同源群39个,其中已知基因29个,主要涉及能量代谢、表达调控、信号传导、细胞免疫、抗细胞凋零、蛋白质加工及其他基因等;将负文库50个克隆拼接可获得ESTs同源群18个,其中已知基因17个,主要涉及细胞免疫、维持细胞代谢、物质转运、信号传导及其他基因等.经RT-PCR验证,从正文库中筛选出的HSPB1、NGT4和NGT7基因在低温条件下的表达量显著高于常温.[结论]综合运用SSH、斑点杂交、克隆测序和RT-PCR可有效筛选并验证凡纳滨对虾耐寒相关基因,为揭示对虾耐寒分子调控机制奠定基础.
[目的]篩選齣對蝦耐寒相關基因,為今後進一步研究對蝦耐寒分子機理提供科學依據.[方法]利用SSH技術構建低溫處理與常溫凡納濱對蝦的基因差異錶達文庫,併通過斑點雜交、剋隆測序分析及候選基因RT-PCR擴增等對差減穫得的耐寒相關功能基因進行驗證.[結果]在構建的正、負文庫768箇剋隆中有152箇為低溫高錶達剋隆、331箇為常溫高錶達剋隆;將正文庫100箇剋隆拼接可穫得ESTs同源群39箇,其中已知基因29箇,主要涉及能量代謝、錶達調控、信號傳導、細胞免疫、抗細胞凋零、蛋白質加工及其他基因等;將負文庫50箇剋隆拼接可穫得ESTs同源群18箇,其中已知基因17箇,主要涉及細胞免疫、維持細胞代謝、物質轉運、信號傳導及其他基因等.經RT-PCR驗證,從正文庫中篩選齣的HSPB1、NGT4和NGT7基因在低溫條件下的錶達量顯著高于常溫.[結論]綜閤運用SSH、斑點雜交、剋隆測序和RT-PCR可有效篩選併驗證凡納濱對蝦耐寒相關基因,為揭示對蝦耐寒分子調控機製奠定基礎.
[목적]사선출대하내한상관기인,위금후진일보연구대하내한분자궤리제공과학의거.[방법]이용SSH기술구건저온처리여상온범납빈대하적기인차이표체문고,병통과반점잡교、극륭측서분석급후선기인RT-PCR확증등대차감획득적내한상관공능기인진행험증.[결과]재구건적정、부문고768개극륭중유152개위저온고표체극륭、331개위상온고표체극륭;장정문고100개극륭병접가획득ESTs동원군39개,기중이지기인29개,주요섭급능량대사、표체조공、신호전도、세포면역、항세포조령、단백질가공급기타기인등;장부문고50개극륭병접가획득ESTs동원군18개,기중이지기인17개,주요섭급세포면역、유지세포대사、물질전운、신호전도급기타기인등.경RT-PCR험증,종정문고중사선출적HSPB1、NGT4화NGT7기인재저온조건하적표체량현저고우상온.[결론]종합운용SSH、반점잡교、극륭측서화RT-PCR가유효사선병험증범납빈대하내한상관기인,위게시대하내한분자조공궤제전정기출.
