基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2014年
11期
1530-1536
,共7页
王晶%贺勇%张继旺%廖娟%曾家伟%周定安
王晶%賀勇%張繼旺%廖娟%曾傢偉%週定安
왕정%하용%장계왕%료연%증가위%주정안
SASH1基因%胞外信号调节激酶%MAP2K2%MAP4K4
SASH1基因%胞外信號調節激酶%MAP2K2%MAP4K4
SASH1기인%포외신호조절격매%MAP2K2%MAP4K4
SASH1 gene%extracellular regulated protein kinase%mitogen-activated protein kinase kinase 2%mitogen-activated protein kinase kinase kinase kinase 4
目的 探讨新候选抑癌基因SASH1与细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路的两个关键分子MAP2K2和MAP4K4的蛋白-蛋白相互作用关系.方法 用Xho Ⅰ和HpaⅠ构建SBP-Flag-SASH1-pBABE-puro反转录病毒载体,转染HEK-293T细胞,通过嘌呤霉素筛选出稳定表达外源性SASH1基因的细胞系.Western blot检测外源性Flag-SASH1蛋白表达,利用pull-down实验、质谱技术、免疫沉淀鉴定和分析与SASH1结合的并可能调节细胞增殖、转移和凋亡等的关键蛋白.用SASH1-siRNA1和SASH1-siRNA2分别转染MDA-MB-231细胞系,以空白组和Negative-siRNA组为对照.72 h后Western blot检测SASH1的干扰效果和P-ERK1/2水平.结果 成功构建稳定表达SBP-Flag-SASH1-pBABE-puro重组质粒的HEK-293T细胞系,SASH1与MAP2K2和MAP4K4结合并发生相互作用.SASH1-siRNA有效抑制MDA-MB-231细胞SASH1蛋白表达(P＜0.05),且P-ERK1/2在SASH1抑制组表达增加.结论 MAP2K2和MAP4K4是SASH1的重要的候选结合蛋白,SASH1可能通过与其直接或间接结合串话ERK信号传导通路,进而调节细胞增殖和迁移等细胞生物学功能.
目的 探討新候選抑癌基因SASH1與細胞外調節蛋白激酶(ERK)信號通路的兩箇關鍵分子MAP2K2和MAP4K4的蛋白-蛋白相互作用關繫.方法 用Xho Ⅰ和HpaⅠ構建SBP-Flag-SASH1-pBABE-puro反轉錄病毒載體,轉染HEK-293T細胞,通過嘌呤黴素篩選齣穩定錶達外源性SASH1基因的細胞繫.Western blot檢測外源性Flag-SASH1蛋白錶達,利用pull-down實驗、質譜技術、免疫沉澱鑒定和分析與SASH1結閤的併可能調節細胞增殖、轉移和凋亡等的關鍵蛋白.用SASH1-siRNA1和SASH1-siRNA2分彆轉染MDA-MB-231細胞繫,以空白組和Negative-siRNA組為對照.72 h後Western blot檢測SASH1的榦擾效果和P-ERK1/2水平.結果 成功構建穩定錶達SBP-Flag-SASH1-pBABE-puro重組質粒的HEK-293T細胞繫,SASH1與MAP2K2和MAP4K4結閤併髮生相互作用.SASH1-siRNA有效抑製MDA-MB-231細胞SASH1蛋白錶達(P＜0.05),且P-ERK1/2在SASH1抑製組錶達增加.結論 MAP2K2和MAP4K4是SASH1的重要的候選結閤蛋白,SASH1可能通過與其直接或間接結閤串話ERK信號傳導通路,進而調節細胞增殖和遷移等細胞生物學功能.
목적 탐토신후선억암기인SASH1여세포외조절단백격매(ERK)신호통로적량개관건분자MAP2K2화MAP4K4적단백-단백상호작용관계.방법 용Xho Ⅰ화HpaⅠ구건SBP-Flag-SASH1-pBABE-puro반전록병독재체,전염HEK-293T세포,통과표령매소사선출은정표체외원성SASH1기인적세포계.Western blot검측외원성Flag-SASH1단백표체,이용pull-down실험、질보기술、면역침정감정화분석여SASH1결합적병가능조절세포증식、전이화조망등적관건단백.용SASH1-siRNA1화SASH1-siRNA2분별전염MDA-MB-231세포계,이공백조화Negative-siRNA조위대조.72 h후Western blot검측SASH1적간우효과화P-ERK1/2수평.결과 성공구건은정표체SBP-Flag-SASH1-pBABE-puro중조질립적HEK-293T세포계,SASH1여MAP2K2화MAP4K4결합병발생상호작용.SASH1-siRNA유효억제MDA-MB-231세포SASH1단백표체(P＜0.05),차P-ERK1/2재SASH1억제조표체증가.결론 MAP2K2화MAP4K4시SASH1적중요적후선결합단백,SASH1가능통과여기직접혹간접결합천화ERK신호전도통로,진이조절세포증식화천이등세포생물학공능.
