生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2014年
5期
660-663
,共4页
龙凤%仇玮祎%常旭%林建波%朱恒奇%张景海%王双
龍鳳%仇瑋祎%常旭%林建波%硃恆奇%張景海%王雙
룡봉%구위의%상욱%림건파%주항기%장경해%왕쌍
Sonic Hedgehog蛋白%真核表达%中和抗体
Sonic Hedgehog蛋白%真覈錶達%中和抗體
Sonic Hedgehog단백%진핵표체%중화항체
sonic hedgehog protein%eukaryotic expression%neutralizing antibody
目的:获得有活性的Sonic Hedgehog(SHH)蛋白N端结构域蛋白纯品,该结构域是SHH蛋白与受体结合结构域,可用作抗原,用于研制抗SHH的中和抗体.方法:应用PCR技术从商业化人Shh基因中分别扩增该基因5'端591和600 bp的片段,并插入真核表达载体pL293,分别在HEK293T细胞中进行瞬时分泌表达,通过His标签纯化后获得SHH-591和SHH-600蛋白纯品,SDS-PAGE和Western印迹对表达产物进行分析,并通过ELISA进行结合活性鉴定.结果:构建了重组表达载体pL293-Shh-N591和pL293-Shh-N600,酶切鉴定和测序证实含有目的基因片段,真核瞬时表达产物均在相对分子质量约20×103处可见与预期相符的条带,该条带可被His标签抗体所识别;纯化获得了SHH-591-His和SHH-600-His蛋白纯品;ELISA结合实验结果显示SHH-591-His和SHH-600-His均能与抗His标签抗体结合,而SHH-591-His与SHH中和抗体的结合能力更强.结论:获得了真核表达的SHH-N蛋白SHH-591-His,可用于下一步中和抗体药物的筛选和后续研究.
目的:穫得有活性的Sonic Hedgehog(SHH)蛋白N耑結構域蛋白純品,該結構域是SHH蛋白與受體結閤結構域,可用作抗原,用于研製抗SHH的中和抗體.方法:應用PCR技術從商業化人Shh基因中分彆擴增該基因5'耑591和600 bp的片段,併插入真覈錶達載體pL293,分彆在HEK293T細胞中進行瞬時分泌錶達,通過His標籤純化後穫得SHH-591和SHH-600蛋白純品,SDS-PAGE和Western印跡對錶達產物進行分析,併通過ELISA進行結閤活性鑒定.結果:構建瞭重組錶達載體pL293-Shh-N591和pL293-Shh-N600,酶切鑒定和測序證實含有目的基因片段,真覈瞬時錶達產物均在相對分子質量約20×103處可見與預期相符的條帶,該條帶可被His標籤抗體所識彆;純化穫得瞭SHH-591-His和SHH-600-His蛋白純品;ELISA結閤實驗結果顯示SHH-591-His和SHH-600-His均能與抗His標籤抗體結閤,而SHH-591-His與SHH中和抗體的結閤能力更彊.結論:穫得瞭真覈錶達的SHH-N蛋白SHH-591-His,可用于下一步中和抗體藥物的篩選和後續研究.
목적:획득유활성적Sonic Hedgehog(SHH)단백N단결구역단백순품,해결구역시SHH단백여수체결합결구역,가용작항원,용우연제항SHH적중화항체.방법:응용PCR기술종상업화인Shh기인중분별확증해기인5'단591화600 bp적편단,병삽입진핵표체재체pL293,분별재HEK293T세포중진행순시분비표체,통과His표첨순화후획득SHH-591화SHH-600단백순품,SDS-PAGE화Western인적대표체산물진행분석,병통과ELISA진행결합활성감정.결과:구건료중조표체재체pL293-Shh-N591화pL293-Shh-N600,매절감정화측서증실함유목적기인편단,진핵순시표체산물균재상대분자질량약20×103처가견여예기상부적조대,해조대가피His표첨항체소식별;순화획득료SHH-591-His화SHH-600-His단백순품;ELISA결합실험결과현시SHH-591-His화SHH-600-His균능여항His표첨항체결합,이SHH-591-His여SHH중화항체적결합능력경강.결론:획득료진핵표체적SHH-N단백SHH-591-His,가용우하일보중화항체약물적사선화후속연구.
