生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2014年
5期
656-659
,共4页
程然然%闫永红%弓蒙蒙%曹培丽%贺福初%王晓晖
程然然%閆永紅%弓矇矇%曹培麗%賀福初%王曉暉
정연연%염영홍%궁몽몽%조배려%하복초%왕효휘
CDC26%短发夹RNA%腺病毒%血糖
CDC26%短髮夾RNA%腺病毒%血糖
CDC26%단발협RNA%선병독%혈당
CDC26%short hairpin RNA%recombinant adenovirus%blood level
目的:构建靶向CDC26基因的短发夹RNA(shRNA)重组腺病毒载体,干扰小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中CDC26的表达.方法:设计小鼠靶向CDC26基因的shRNA,插入穿梭质粒pENTRY-EF1 a-EGFP-Mir30,通过Gateway系统获得重组腺病毒载体pAd-CDC26-shRNA;线性化后转染HEK293A细胞,进行病毒包装;用包装的重组腺病毒感染MEF,24 h后收集细胞,提取总RNA,逆转录后用荧光定量PCR法检测MEF内CDC26 mRNA的变化,以检测所设计shRNA的敲低效率.结果:构建的重组腺病毒载体pAd-CDC26-shRNA经酶切鉴定后正确;转染HEK293A细胞后8d,观察到细胞病变及GFP的大量表达,表明重组腺病毒包装成功;感染MEF后,实时荧光定量PCR检测表明,细胞内CDC26 mRNA的水平较对照组敲低了73.14％,腺病毒注射7d后,注射CDC26 shRNA的小鼠血糖较对照组明显降低.结论:构建了具有较高敲低效果的小鼠CDC26基因shRNA重组腺病毒,并且具有体内活性.
目的:構建靶嚮CDC26基因的短髮夾RNA(shRNA)重組腺病毒載體,榦擾小鼠胚胎成纖維細胞(MEF)中CDC26的錶達.方法:設計小鼠靶嚮CDC26基因的shRNA,插入穿梭質粒pENTRY-EF1 a-EGFP-Mir30,通過Gateway繫統穫得重組腺病毒載體pAd-CDC26-shRNA;線性化後轉染HEK293A細胞,進行病毒包裝;用包裝的重組腺病毒感染MEF,24 h後收集細胞,提取總RNA,逆轉錄後用熒光定量PCR法檢測MEF內CDC26 mRNA的變化,以檢測所設計shRNA的敲低效率.結果:構建的重組腺病毒載體pAd-CDC26-shRNA經酶切鑒定後正確;轉染HEK293A細胞後8d,觀察到細胞病變及GFP的大量錶達,錶明重組腺病毒包裝成功;感染MEF後,實時熒光定量PCR檢測錶明,細胞內CDC26 mRNA的水平較對照組敲低瞭73.14％,腺病毒註射7d後,註射CDC26 shRNA的小鼠血糖較對照組明顯降低.結論:構建瞭具有較高敲低效果的小鼠CDC26基因shRNA重組腺病毒,併且具有體內活性.
목적:구건파향CDC26기인적단발협RNA(shRNA)중조선병독재체,간우소서배태성섬유세포(MEF)중CDC26적표체.방법:설계소서파향CDC26기인적shRNA,삽입천사질립pENTRY-EF1 a-EGFP-Mir30,통과Gateway계통획득중조선병독재체pAd-CDC26-shRNA;선성화후전염HEK293A세포,진행병독포장;용포장적중조선병독감염MEF,24 h후수집세포,제취총RNA,역전록후용형광정량PCR법검측MEF내CDC26 mRNA적변화,이검측소설계shRNA적고저효솔.결과:구건적중조선병독재체pAd-CDC26-shRNA경매절감정후정학;전염HEK293A세포후8d,관찰도세포병변급GFP적대량표체,표명중조선병독포장성공;감염MEF후,실시형광정량PCR검측표명,세포내CDC26 mRNA적수평교대조조고저료73.14％,선병독주사7d후,주사CDC26 shRNA적소서혈당교대조조명현강저.결론:구건료구유교고고저효과적소서CDC26기인shRNA중조선병독,병차구유체내활성.
