CAJ | 학술논문

目的:进行紫杉醇药物生物合成前五步催化酶二磷酸盐合酶(GGPPS)、紫杉二烯合酶(TS)、紫杉二烯5α羟化酶(THY5α)、紫杉二烯5α-O-乙酰转移酶(TAT)和紫杉烷10β羟化酶(TDH)基因在大肠杆菌异源生物合成途径的组建及串联,实现单个表达及串联表达,并试图通过连续生物催化获得紫杉醇中间体紫衫二烯.方法:依据合成生物学中Brick基因组装方法,通过对载体pET30a的酶切位点进行定向改造,设计独特的BglⅡ/BamH Ⅰ和Xba Ⅰ/Spe Ⅰ串联表达盒,在大肠杆菌BM Rosetta(DE3)中表达产物.结果:设计多基因表达盒,实现紫杉醇药物生物合成前五步催化酶的单个表达,GGPPS和TS以及THY5α、TAT和TDH的串联表达.结论:利用BglBrick/BioBrick基因组装方法,可以实现紫杉醇生物合成催化酶的快速组装及后续表达.
목적:진행자삼순약물생물합성전오보최화매이린산염합매(GGPPS)、자삼이희합매(TS)、자삼이희5α간화매(THY5α)、자삼이희5α-O-을선전이매(TAT)화자삼완10β간화매(TDH)기인재대장간균이원생물합성도경적조건급천련,실현단개표체급천련표체,병시도통과련속생물최화획득자삼순중간체자삼이희.방법:의거합성생물학중Brick기인조장방법,통과대재체pET30a적매절위점진행정향개조,설계독특적BglⅡ/BamH Ⅰ화Xba Ⅰ/Spe Ⅰ천련표체합,재대장간균BM Rosetta(DE3)중표체산물.결과:설계다기인표체합,실현자삼순약물생물합성전오보최화매적단개표체,GGPPS화TS이급THY5α、TAT화TDH적천련표체.결론:이용BglBrick/BioBrick기인조장방법,가이실현자삼순생물합성최화매적쾌속조장급후속표체.