中国家禽
中國傢禽
중국가금
CHINA POULTRY
2014年
20期
17-21
,共5页
臧凤霞%张雅春%王伟%赵颖慧%李越%周长良%陈洪岩%孟庆文
臧鳳霞%張雅春%王偉%趙穎慧%李越%週長良%陳洪巖%孟慶文
장봉하%장아춘%왕위%조영혜%리월%주장량%진홍암%맹경문
鸭RIG-Ⅰ%helicase结构域%RD结构域%原核表达%单克隆抗体
鴨RIG-Ⅰ%helicase結構域%RD結構域%原覈錶達%單剋隆抗體
압RIG-Ⅰ%helicase결구역%RD결구역%원핵표체%단극륭항체
利用PCR技术将鸭维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)helicase区和RD区部分编码序列分别进行扩增,并分别命名为c、d段;克隆到pET30a原核表达载体,构建了重组原核表达质粒pET30a-c和pET30a-d,通过转化BL21 (DE3)感受态菌、IPTG诱导、镍柱纯化表达蛋白,将纯化的c、d蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体(mAb),采用ELISA、Western blot和间接免疫荧光试验对单克隆抗体进行鉴定分析.获得鼠抗鸭RIG-Ⅰ单克隆抗体有14株与原核分段表达的c、d蛋白有良好的反应性,其中3株与真核表达的RIG-Ⅰ蛋白有良好的反应性.制备的鼠抗鸭RIG-Ⅰ单克隆抗体为RIG-Ⅰ在抗病毒天然免疫信号转导途径的研究奠定了基础.
利用PCR技術將鴨維甲痠誘導基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)helicase區和RD區部分編碼序列分彆進行擴增,併分彆命名為c、d段;剋隆到pET30a原覈錶達載體,構建瞭重組原覈錶達質粒pET30a-c和pET30a-d,通過轉化BL21 (DE3)感受態菌、IPTG誘導、鎳柱純化錶達蛋白,將純化的c、d蛋白免疫小鼠製備單剋隆抗體(mAb),採用ELISA、Western blot和間接免疫熒光試驗對單剋隆抗體進行鑒定分析.穫得鼠抗鴨RIG-Ⅰ單剋隆抗體有14株與原覈分段錶達的c、d蛋白有良好的反應性,其中3株與真覈錶達的RIG-Ⅰ蛋白有良好的反應性.製備的鼠抗鴨RIG-Ⅰ單剋隆抗體為RIG-Ⅰ在抗病毒天然免疫信號轉導途徑的研究奠定瞭基礎.
이용PCR기술장압유갑산유도기인Ⅰ(RIG-Ⅰ)helicase구화RD구부분편마서렬분별진행확증,병분별명명위c、d단;극륭도pET30a원핵표체재체,구건료중조원핵표체질립pET30a-c화pET30a-d,통과전화BL21 (DE3)감수태균、IPTG유도、얼주순화표체단백,장순화적c、d단백면역소서제비단극륭항체(mAb),채용ELISA、Western blot화간접면역형광시험대단극륭항체진행감정분석.획득서항압RIG-Ⅰ단극륭항체유14주여원핵분단표체적c、d단백유량호적반응성,기중3주여진핵표체적RIG-Ⅰ단백유량호적반응성.제비적서항압RIG-Ⅰ단극륭항체위RIG-Ⅰ재항병독천연면역신호전도도경적연구전정료기출.
