广东农业科学
廣東農業科學
엄동농업과학
GUANGDONG AGRICULTURAL SCIENCES
2014年
20期
141-144
,共4页
姚婧%唐燕琼%黄明忠%丁亚操%杨光穗
姚婧%唐燕瓊%黃明忠%丁亞操%楊光穗
요청%당연경%황명충%정아조%양광수
火焰兰%SRAP-PCR%体系优化
火燄蘭%SRAP-PCR%體繫優化
화염란%SRAP-PCR%체계우화
为建立火焰兰SRAP-PCR体系,采用U20(55)均匀试验设计,以10份火焰兰种质基因组DNA为模板,用3对SRAP引物对DNA模板、Mg2+、引物、Taq DNA聚合酶和dNTPs等5个因素的浓度进行优化组合和验证.结果表明,提取的火焰兰基因组DNA纯度高、完整性好;利用引物对Me6/Em6进行PCR扩增,对20个处理初步筛选出扩增条带较清晰,多态性丰富的处理,再用2个DNA模板进行复筛,获得最佳反应体系(20μL):模板DNA 60 ng、Mg2+2.0 mmol/L、引物1.0 μmol/L、Taq DNA聚合酶1.2 U、dNTPs 0.20 mmol/L.最后用2对引物、8份火焰兰种质来验证优化SRAP-PCR体系,其所获条带清晰,多态性丰富.
為建立火燄蘭SRAP-PCR體繫,採用U20(55)均勻試驗設計,以10份火燄蘭種質基因組DNA為模闆,用3對SRAP引物對DNA模闆、Mg2+、引物、Taq DNA聚閤酶和dNTPs等5箇因素的濃度進行優化組閤和驗證.結果錶明,提取的火燄蘭基因組DNA純度高、完整性好;利用引物對Me6/Em6進行PCR擴增,對20箇處理初步篩選齣擴增條帶較清晰,多態性豐富的處理,再用2箇DNA模闆進行複篩,穫得最佳反應體繫(20μL):模闆DNA 60 ng、Mg2+2.0 mmol/L、引物1.0 μmol/L、Taq DNA聚閤酶1.2 U、dNTPs 0.20 mmol/L.最後用2對引物、8份火燄蘭種質來驗證優化SRAP-PCR體繫,其所穫條帶清晰,多態性豐富.
위건립화염란SRAP-PCR체계,채용U20(55)균균시험설계,이10빈화염란충질기인조DNA위모판,용3대SRAP인물대DNA모판、Mg2+、인물、Taq DNA취합매화dNTPs등5개인소적농도진행우화조합화험증.결과표명,제취적화염란기인조DNA순도고、완정성호;이용인물대Me6/Em6진행PCR확증,대20개처리초보사선출확증조대교청석,다태성봉부적처리,재용2개DNA모판진행복사,획득최가반응체계(20μL):모판DNA 60 ng、Mg2+2.0 mmol/L、인물1.0 μmol/L、Taq DNA취합매1.2 U、dNTPs 0.20 mmol/L.최후용2대인물、8빈화염란충질래험증우화SRAP-PCR체계,기소획조대청석,다태성봉부.
