岭南心血管病杂志
嶺南心血管病雜誌
령남심혈관병잡지
SOUTH CHINA JOURNAL OF CARDIOLOGY
2014年
5期
636-639
,共4页
雷和平%麦丽萍%朱杰宁%单志新%杨敏%林秋雄%余细勇
雷和平%麥麗萍%硃傑寧%單誌新%楊敏%林鞦雄%餘細勇
뢰화평%맥려평%주걸저%단지신%양민%림추웅%여세용
血管紧张素Ⅱ2型受体%慢病毒表达载体%293T细胞
血管緊張素Ⅱ2型受體%慢病毒錶達載體%293T細胞
혈관긴장소Ⅱ2형수체%만병독표체재체%293T세포
angiotensin Ⅱ type 2 receptor%lentiviral expression vector%293T cells
目的 构建携带人血管紧张素Ⅱ2型受体(angiotensinⅡtype 2 receptor,AGTR2)基因的慢病毒表达载体.方法 运用基因重组技术,将A GTR2基因克隆至慢病毒载体pLVX-IRES-ZsGreen1中,获得慢病毒表达载体pLVX-A GTR2-IRES-ZsGreen1,XhoI、BamHI双酶切反应及测序分析加以鉴定.在Lipofectamine 2000的介导下将慢病毒表达载体质粒和包装质粒(pHelper1.0、pHelper2.0)共转染人胚肾细胞系(293T),包装慢病毒载体并测定滴度.反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测AGTR2基因在感染病毒的293T细胞中的表达水平.结果 所获AGTR2基因测序证明与GenBank中序列一致;成功构建慢病毒表达载体pLVX-A GTR2-IRES-ZsGreen1并获得相应的慢病毒.收集、浓缩病毒后测定其滴度为1.2×108 TU/mL.构建的携带A GTR2基因的慢病毒表达载体可有效转染293T细胞,RT-PCR结果表明AGTR2基因呈高表达.结论 成功构建AGTR2慢病毒表达载体,为进一步研究其功能建立了实验基础.
目的 構建攜帶人血管緊張素Ⅱ2型受體(angiotensinⅡtype 2 receptor,AGTR2)基因的慢病毒錶達載體.方法 運用基因重組技術,將A GTR2基因剋隆至慢病毒載體pLVX-IRES-ZsGreen1中,穫得慢病毒錶達載體pLVX-A GTR2-IRES-ZsGreen1,XhoI、BamHI雙酶切反應及測序分析加以鑒定.在Lipofectamine 2000的介導下將慢病毒錶達載體質粒和包裝質粒(pHelper1.0、pHelper2.0)共轉染人胚腎細胞繫(293T),包裝慢病毒載體併測定滴度.反轉錄聚閤酶鏈反應(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)法檢測AGTR2基因在感染病毒的293T細胞中的錶達水平.結果 所穫AGTR2基因測序證明與GenBank中序列一緻;成功構建慢病毒錶達載體pLVX-A GTR2-IRES-ZsGreen1併穫得相應的慢病毒.收集、濃縮病毒後測定其滴度為1.2×108 TU/mL.構建的攜帶A GTR2基因的慢病毒錶達載體可有效轉染293T細胞,RT-PCR結果錶明AGTR2基因呈高錶達.結論 成功構建AGTR2慢病毒錶達載體,為進一步研究其功能建立瞭實驗基礎.
목적 구건휴대인혈관긴장소Ⅱ2형수체(angiotensinⅡtype 2 receptor,AGTR2)기인적만병독표체재체.방법 운용기인중조기술,장A GTR2기인극륭지만병독재체pLVX-IRES-ZsGreen1중,획득만병독표체재체pLVX-A GTR2-IRES-ZsGreen1,XhoI、BamHI쌍매절반응급측서분석가이감정.재Lipofectamine 2000적개도하장만병독표체재체질립화포장질립(pHelper1.0、pHelper2.0)공전염인배신세포계(293T),포장만병독재체병측정적도.반전록취합매련반응(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)법검측AGTR2기인재감염병독적293T세포중적표체수평.결과 소획AGTR2기인측서증명여GenBank중서렬일치;성공구건만병독표체재체pLVX-A GTR2-IRES-ZsGreen1병획득상응적만병독.수집、농축병독후측정기적도위1.2×108 TU/mL.구건적휴대A GTR2기인적만병독표체재체가유효전염293T세포,RT-PCR결과표명AGTR2기인정고표체.결론 성공구건AGTR2만병독표체재체,위진일보연구기공능건립료실험기출.
