中南医学科学杂志
中南醫學科學雜誌
중남의학과학잡지
JOURNAL OF UNIVERSITY OF SOUTH CHINA(MEDICAL EDITION)
2014年
6期
554-557,571
,共5页
刘德勇%张庆丽%龙晓兰%彭和人%谢海龙
劉德勇%張慶麗%龍曉蘭%彭和人%謝海龍
류덕용%장경려%룡효란%팽화인%사해룡
S100A11%Huh-7细胞%慢病毒载体
S100A11%Huh-7細胞%慢病毒載體
S100A11%Huh-7세포%만병독재체
目的 构建S100A11基因慢病毒表达载体,建立Huh-7 S100A11稳定细胞株,并鉴定其表达. 方法 RT-PCR扩增S100A11基因片段,与pWPT载体经Mlu Ⅰ和Not Ⅰ同时酶切后连接,构建慢病毒表达载体pWPT-S100A11;将表达载体pWPT-GFP和pWPT-S100A11与慢病毒包装质粒pMD2.G和psPAX2共同感染293T细胞,获得携带GFP和S100A11基因的慢病毒,将两种慢病毒分别感染Huh-7细胞,获得Huh-7 S100A11和Huh-7GFP稳定细胞株;利用Real-Time PCR和Western Blotting实验方法检测感染后S100A11的过表达情况. 结果 成功构建慢病毒表达载体pWPT-S100A11;慢病毒感染Huh-7细胞株后,阳性对照Huh-7GFP经荧光镜检测传染率达95％;感染Huh-7细胞后S100A11的mRNA和蛋白表达量均增加. 结论 成功构建慢病毒表达载体pWPT-S100A11,并建立了Huh-7S100A11稳定细胞株,为进一步研究S100A11基因在肝癌中的生物学功能和机制奠定了基础.
目的 構建S100A11基因慢病毒錶達載體,建立Huh-7 S100A11穩定細胞株,併鑒定其錶達. 方法 RT-PCR擴增S100A11基因片段,與pWPT載體經Mlu Ⅰ和Not Ⅰ同時酶切後連接,構建慢病毒錶達載體pWPT-S100A11;將錶達載體pWPT-GFP和pWPT-S100A11與慢病毒包裝質粒pMD2.G和psPAX2共同感染293T細胞,穫得攜帶GFP和S100A11基因的慢病毒,將兩種慢病毒分彆感染Huh-7細胞,穫得Huh-7 S100A11和Huh-7GFP穩定細胞株;利用Real-Time PCR和Western Blotting實驗方法檢測感染後S100A11的過錶達情況. 結果 成功構建慢病毒錶達載體pWPT-S100A11;慢病毒感染Huh-7細胞株後,暘性對照Huh-7GFP經熒光鏡檢測傳染率達95％;感染Huh-7細胞後S100A11的mRNA和蛋白錶達量均增加. 結論 成功構建慢病毒錶達載體pWPT-S100A11,併建立瞭Huh-7S100A11穩定細胞株,為進一步研究S100A11基因在肝癌中的生物學功能和機製奠定瞭基礎.
목적 구건S100A11기인만병독표체재체,건립Huh-7 S100A11은정세포주,병감정기표체. 방법 RT-PCR확증S100A11기인편단,여pWPT재체경Mlu Ⅰ화Not Ⅰ동시매절후련접,구건만병독표체재체pWPT-S100A11;장표체재체pWPT-GFP화pWPT-S100A11여만병독포장질립pMD2.G화psPAX2공동감염293T세포,획득휴대GFP화S100A11기인적만병독,장량충만병독분별감염Huh-7세포,획득Huh-7 S100A11화Huh-7GFP은정세포주;이용Real-Time PCR화Western Blotting실험방법검측감염후S100A11적과표체정황. 결과 성공구건만병독표체재체pWPT-S100A11;만병독감염Huh-7세포주후,양성대조Huh-7GFP경형광경검측전염솔체95％;감염Huh-7세포후S100A11적mRNA화단백표체량균증가. 결론 성공구건만병독표체재체pWPT-S100A11,병건립료Huh-7S100A11은정세포주,위진일보연구S100A11기인재간암중적생물학공능화궤제전정료기출.
