中南医学科学杂志
中南醫學科學雜誌
중남의학과학잡지
JOURNAL OF UNIVERSITY OF SOUTH CHINA(MEDICAL EDITION)
2014年
6期
541-544,553
,共5页
汪宗桂%左长清%刘振杰%刘新光
汪宗桂%左長清%劉振傑%劉新光
왕종계%좌장청%류진걸%류신광
C11orf17%原核表达%生物信息学
C11orf17%原覈錶達%生物信息學
C11orf17%원핵표체%생물신식학
目的 利用基因工程技术获取原核表达的C11orf17蛋白,结合生物信息学初步预测其功能. 方法 以K562细胞的cDNA为模板,PCR扩增C11orf17的基因序列;双酶切后将目的基因亚克隆至原核表达载体pET-32a上,将测序正确的重组表达质粒pET-32a-C 11 orf17转化到E.coli BL21,经诱导后SDS-PAGE及Western blot 检测融合蛋白表达,并分析其可溶性.采用UGET软件预测C11orf17共表达基因,蛋白质互作数据库挖掘C11orf17基因已知互作蛋白,在线软件Gather富集共表达基因生物功能. 结果 成功构建重组表达质粒pET-32a-C11orf17,此重组体经诱导后能在E.coli BL21高效表达C11orf17的融合蛋白,UGET分析C11orf17前300共表达探针中,包含267个已知基因,共表达基因主要富集细胞交流、信号传导、细胞周期基因功能本体.蛋白互作数据库表明,C11orf17与PRKACA蛋白互作,后者为细胞周期调控重要分子. 结论 在原核细胞中成功表达出C11orf17蛋白,生物信息预测其可能是细胞周期调控重要新分子,为后续研究提供了方向和线索.
目的 利用基因工程技術穫取原覈錶達的C11orf17蛋白,結閤生物信息學初步預測其功能. 方法 以K562細胞的cDNA為模闆,PCR擴增C11orf17的基因序列;雙酶切後將目的基因亞剋隆至原覈錶達載體pET-32a上,將測序正確的重組錶達質粒pET-32a-C 11 orf17轉化到E.coli BL21,經誘導後SDS-PAGE及Western blot 檢測融閤蛋白錶達,併分析其可溶性.採用UGET軟件預測C11orf17共錶達基因,蛋白質互作數據庫挖掘C11orf17基因已知互作蛋白,在線軟件Gather富集共錶達基因生物功能. 結果 成功構建重組錶達質粒pET-32a-C11orf17,此重組體經誘導後能在E.coli BL21高效錶達C11orf17的融閤蛋白,UGET分析C11orf17前300共錶達探針中,包含267箇已知基因,共錶達基因主要富集細胞交流、信號傳導、細胞週期基因功能本體.蛋白互作數據庫錶明,C11orf17與PRKACA蛋白互作,後者為細胞週期調控重要分子. 結論 在原覈細胞中成功錶達齣C11orf17蛋白,生物信息預測其可能是細胞週期調控重要新分子,為後續研究提供瞭方嚮和線索.
목적 이용기인공정기술획취원핵표체적C11orf17단백,결합생물신식학초보예측기공능. 방법 이K562세포적cDNA위모판,PCR확증C11orf17적기인서렬;쌍매절후장목적기인아극륭지원핵표체재체pET-32a상,장측서정학적중조표체질립pET-32a-C 11 orf17전화도E.coli BL21,경유도후SDS-PAGE급Western blot 검측융합단백표체,병분석기가용성.채용UGET연건예측C11orf17공표체기인,단백질호작수거고알굴C11orf17기인이지호작단백,재선연건Gather부집공표체기인생물공능. 결과 성공구건중조표체질립pET-32a-C11orf17,차중조체경유도후능재E.coli BL21고효표체C11orf17적융합단백,UGET분석C11orf17전300공표체탐침중,포함267개이지기인,공표체기인주요부집세포교류、신호전도、세포주기기인공능본체.단백호작수거고표명,C11orf17여PRKACA단백호작,후자위세포주기조공중요분자. 결론 재원핵세포중성공표체출C11orf17단백,생물신식예측기가능시세포주기조공중요신분자,위후속연구제공료방향화선색.
